Anticorps Monoclonal Anti-Polymérase gamma d'ADN pour WB, ELISA - P54098

Spécifications et Paramètres Principaux du Produit

Contexte Biologique : Fonction et Localisation de la Polymérase gamma d'ADN

• La sous-unité gamma-1 de la polymérase d'ADN (POLG) est le cœur catalytique de la polymérase d'ADN mitochondriale, responsable de la réplication du génome mitochondrial entier. Elle synthétise les brins heavy et light en utilisant des matrices d'ADN simple brin et des amorces d'ARN, fonctionnant comme un réplisome hautement processif avec l'hélicase TWNK et SSBP1. Références connexes : PMID:11477093, PMID:11897778, PMID:15917273
• POLG possède une activité de relecture exonucléase 3'→5' qui corrige les substitutions de bases, les additions de bases uniques et les délétions, assurant une haute fidélité lors de la réplication de l'ADNmt. Lorsqu'une incorporation incorrecte se produit, l'enzyme passe en mode d'édition nucléolytique pour éliminer le nucléotide erroné. Références connexes : PMID:10827171, PMID:11477094, PMID:11504725
• Après avoir terminé la synthèse de l'ADNmt, POLG médie la dégradation exonucléolytique 3'→5' au niveau du brèche pour faciliter une ligature appropriée, et présente également une activité lyase 5'-désoxyribose phosphate (dRP), lui permettant de participer à la voie de réparation par excision de base mitochondriale. Références connexes : PMID:9770471, PMID:11477093, PMID:15167897
• Les mutations du gène POLG sont liées à un spectre de troubles mitochondriaux, y compris l'ophtalmoplégie externe progressive (PEO), les neuropathies, l'épilepsie et le syndrome de Leigh. C'est un gène principal de maladie mitochondriale associé aux syndromes de déplétion et de délétion de l'ADN mitochondrial.
• La protéine se localise dans la matrice mitochondriale et est une composante du nucléoïde mitochondrial, où elle s'associe à l'ADNmt pour faciliter la réplication et la maintenance.
• POLG est une grande enzyme multifonctionnelle (environ 140 kDa) appartenant à la famille des polymérases d'ADN de type A. Elle nécessite des ions magnésium pour les activités polymérase et exonucléase.

Guidance Expérimentale et Conseils Techniques

• L'immunogène utilisé pour produire cet anticorps correspond à un peptide situé dans la région C-terminale (acides aminés 1140–1239) de POLG humaine. Cet épitope se trouve en dehors des domaines catalytiques et peut permettre la reconnaissance des formes sauvages et de certaines formes mutantes. Cependant, pour chaque système expérimental, vérifiez l'accessibilité de l'épitope dans des conditions natives et dénaturantes.
• Pour le Western blot, le poids moléculaire prédit est de 140 kDa. Utilisez un pourcentage de gel approprié et des conditions de transfert pour les protéines de poids moléculaire élevé, et incluez un témoin positif tel que des lysats mitochondriaux de cellules humaines ou de souris.
• La réactivité croisée avec POLG de souris a été confirmée, rendant cet anticorps adapté aux études dans des modèles murains de maladie mitochondriale. En raison de la forte conservation de la séquence, une réactivité croisée avec d'autres espèces est possible mais doit être validée empiriquement.
• Pour l'ELISA, l'anticorps peut être utilisé comme réactif de capture ou de détection. Effectuez un titrage de l'anticorps pour déterminer la concentration de travail optimale, et assurez-vous que l'antigène de revêtement contient l'épitope C-terminal ou un fragment recombinant de POLG couvrant la région de l'immunogène.
• Notez que l'expression de POLG est ubiquitaire mais enrichie dans les tissus à forte demande énergétique. Envisagez de valider la sensibilité de détection dans des systèmes d'échantillons pertinents, tels que des préparations mitochondriales de foie, de muscle ou de cerveau.

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