Anticorps polyclonal anti-ADN polymérase êta pour WB - Q9Y253

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'ADN polymérase êta

• L'ADN polymérase êta (POLH), également connue sous le nom de protéine RAD30A ou XP-V, est une ADN polymérase de la famille Y spécialisée dans la synthèse translésionnelle (TLS) à travers les dimères de pyrimidine cyclobutane induits par les UV et autres lésions déformantes. Références associées : PMID:10385124, PMID:11743006, PMID:16357261
• Elle coopère avec le complexe POLZ (REV3L-REV7-POLD2-POLD3) pour allonger les amorces après le contournement de la lésion, en insérant un ou deux nucléotides en face du site endommagé. Références associées : PMID:24449906
• POLH cible l'ADN polymérase iota (POLI) vers les foyers de réplication, facilitant une réponse coordonnée aux dommages. Références associées : PMID:12606586
• Au niveau des sites abasiques, POLH forme une base de Schiff avec le 5′-désoxyribose phosphate, piégeant covalent l'enzyme et inhibant sa synthèse d'ADN pour prévenir la mutagénèse pendant la réparation par excision de base. Références associées : PMID:14630940
• La protéine se localise dans le noyau et s'enrichit au niveau des foyers de réplication en cas de dommage à l'ADN.
• POLH est soumise à l'ubiquitination, formant des liaisons isopeptidiques qui modulent son recrutement et son activité.
• Les mutations de POLH sont responsables de la variante du Xeroderma pigmentosum (XP-V), une maladie récessive caractérisée par une sensibilité extrême aux UV et un risque élevé de cancer de la peau.
• Elle joue également un rôle dans l'hypermutation somatique des gènes d'immunoglobulines, contribuant à la diversité des anticorps. Références associées : PMID:11376341, PMID:14734526

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène correspond à la région centrale (aa 322–520) de POLH humaine, qui contient des domaines conservés essentiels pour l'activité polymérase et le contournement des lésions.
• Pour le Western blot (WB), s'attendre à une bande spécifique d'environ 78 kDa dans les lysats nucléaires de lignées cellulaires humaines, murines ou de rat.
• Pour l'immunofluorescence (IF/ICC), optimiser la fixation et la perméabilisation pour détecter les foyers nucléaires, qui augmentent après un traitement aux UV.
• Pour l'ELISA, pré-revêtir la protéine immunogène ou utiliser une approche de revêtement direct, et envisager une étape de blocage pour minimiser le bruit de fond.
• Valider la spécificité de l'anticorps dans des échantillons knock-out ou traités par siRNA pour confirmer la reconnaissance de la cible.

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