Anticorps polyclonal de lapin anti-vinculine pour WB, IF/ICC, ELISA - P18206

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la vinculine

• La vinculine est une protéine liant les filaments d'actine (F-actine) qui joue un rôle central dans l'adhésion cellule-matrice (adhésions focales) et l'adhésion cellule-cellule (jonctions adhérentes).
• Elle potentialise la mécanosensibilité en régulant l'expression de la E-cadhérine à la surface cellulaire et en stabilisant le complexe de E-cadhérine, contribuant ainsi à la morphologie et à la locomotion cellulaires.
• La protéine se localise dans plusieurs sites subcellulaires, notamment les adhésions focales, les jonctions adhérentes, les podosomes, le cytosquelette périnucléaire et le sarcolemme des cellules musculaires.
• Un variant d'épissage spécifique au muscle, la métavinculine (MV), provient de l'épissage alternatif du gène VCL et intègre un exon supplémentaire, conduisant à une isoforme plus grande dotée de fonctions uniques dans le muscle cardiaque et lisse.
• Les modifications post-traductionnelles telles que la phosphorylation, l'acétylation et la palmitoylation régulent l'activation, le ciblage et les interactions protéiques de la vinculine.
• Les mutations du gène VCL sont liées à des cardiomyopathies, notamment la cardiomyopathie dilatée (CMD1W) et la cardiomyopathie hypertrophique (CMH15), soulignant son rôle critique dans l'intégrité du muscle cardiaque.
• La vinculine sert de plateforme pour de nombreux partenaires de liaison (ex. : taline, α-actinine, paxilline), intégrant les signaux mécaniques et chimiques au niveau des sites d'adhésion.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène correspond à la région C-terminale (acides aminés 751–850), qui est conservée entre la vinculine et la métavinculine ; par conséquent, l'anticorps devrait reconnaître les deux isoformes, sauf indication contraire.
• Pour le western blot, une bande proche de 124 kDa est attendue ; validez la spécificité en utilisant des lysats de lignées cellulaires humaines, de souris ou de rat connues pour exprimer la vinculine (ex. : HeLa, NIH/3T3 ou C2C12).
• En immunofluorescence/immunocytochimie, optimisez la fixation (ex. : paraformaldéhyde à 4 %) et la perméabilisation pour préserver les structures des adhésions focales ; une co-coloration avec la F-actine ou la paxilline peut servir de contrôle positif.
• Pour l'ELISA, envisagez un format direct ou sandwich ; effectuez des expériences de titration pour déterminer les concentrations optimales de revêtement et d'anticorps pour votre plaque et votre système de détection spécifiques.
• Lorsque vous travaillez avec des tissus musculaires, gardez à l'esprit que la métavinculine migre à un poids moléculaire plus élevé et peut présenter une expression différentielle ; incluez les contrôles appropriés.

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