Anticorps Polyclonal de Lapin Anti-Ubiquitine pour WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P0CG47

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'Ubiquitine

• L'ubiquitine est codée par le gène UBB et produite sous forme de polyubiquitine-B, une protéine précurseur qui est clivée pour donner des monomères d'ubiquitine matures. L'ubiquitine est une protéine hautement conservée de 76 acides aminés impliquée dans la modification post-traductionnelle des protéines cibles.
• L'ubiquitine existe soit attachée de manière covalente à d'autres protéines, soit libre (non ancrée). Lorsqu'elle est liée de manière covalente, elle est conjuguée via une liaison isopeptidique aux protéines cibles, formant des monomères (monoubiquitine) ou des chaînes de polyubiquitine liées par différents résidus Lys (Lys-6, Lys-11, Lys-29, Lys-33, Lys-48, Lys-63) ou des chaînes linéaires liées via la Méthionine initiateur.
• Différents types de liaisons dans les chaînes de polyubiquitine dictent des devenirs cellulaires distincts : les chaînes liées par Lys-48 ciblent les protéines pour la dégradation par le protéasome, tandis que les chaînes liées par Lys-63 sont impliquées dans l'endocytose, les réponses aux dommages à l'ADN et la signalisation NF-kappa-B. D'autres liaisons (Lys-6, Lys-11, Lys-29, Lys-33) participent à la réparation de l'ADN, à l'ERAD, à la régulation du cycle cellulaire et à la modification des kinases.
• En plus des formes conjuguées, les chaînes de polyubiquitine libres non ancrées jouent également des rôles de signalisation, comme l'activation de protéines kinases et la modulation d'autres voies de signalisation.
• L'ubiquitine se localise dans plusieurs compartiments subcellulaires, y compris le cytoplasme, le noyau et la membrane externe des mitochondries, reflétant son implication large dans les processus cellulaires.
• Les modifications post-traductionnelles de l'ubiquitine elle-même incluent la phosphorylation et l'ADP-ribosylation, qui peuvent moduler sa fonction. La protéine contient une liaison isopeptidique et fait partie de la voie de conjugaison Ubl.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène couvre l'ubiquitine pleine longueur (acides aminés 1-228), correspondant au précurseur polyubiquitine-B. Cet anticorps polyclonal est censé reconnaître à la fois l'ubiquitine libre et les protéines conjuguées à l'ubiquitine, mais il peut également détecter les chaînes de polyubiquitine. En WB, envisagez d'utiliser des conditions dénaturantes et réductrices pour distinguer l'ubiquitine monomérique des conjugués de polyubiquitine.
• Pour l'IHC-P, la récupération antigénique peut améliorer la détection, et des contrôles appropriés (par exemple, utilisant des échantillons avec knockdown ou knockout) sont conseillés pour confirmer la spécificité. Le signal peut être diffus en raison de la distribution ubiquitaire de l'ubiquitine.
• En IF/ICC, les méthodes de fixation et de perméabilisation doivent être optimisées, car la localisation de l'ubiquitine varie selon les compartiments. Une co-marquage avec des marqueurs d'organites peut faciliter l'interprétation.
• Les protocoles ELISA doivent inclure des courbes standard utilisant de l'ubiquitine recombinante pour quantifier les niveaux d'ubiquitine libre ou totale. Assurez-vous que l'anticorps est validé pour le format d'essai spécifique et le type d'échantillon.
• L'anticorps présente une large réactivité croisée prédite. Pour les espèces non humaines, validez la réactivité dans le système d'échantillon pertinent, car l'homologie de séquence est élevée mais peut varier.

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