Ubiquitine Lapin pAb - P0CG47

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'Ubiquitine

• Codée par le gène UBB, la polyubiquitine-B est clivée en plusieurs monomères d'ubiquitine qui peuvent être conjugués aux protéines cibles.
• La fixation covalente de l'ubiquitine (monoubiquitination) ou de chaînes de polyubiquitine aux protéines régule divers processus cellulaires. Les types de liaison des chaînes de polyubiquitine déterminent les conséquences fonctionnelles : les chaînes liées par Lys-48 ciblent les substrats pour la dégradation protéasomale ; les chaînes liées par Lys-63 sont impliquées dans l'endocytose, les réponses aux dommages à l'ADN et la signalisation NF-kappa-B ; les chaînes linéaires participent à la signalisation cellulaire.
• La conjugaison de l'ubiquitine peut également se produire via d'autres liaisons (Lys-6, Lys-11, Lys-29, Lys-33) jouant un rôle dans la réparation de l'ADN, la dégradation associée au réticulum endoplasmique, les réponses au stress et la modification des kinases.
• Les chaînes de polyubiquitine libres (non ancrées) fonctionnent indépendamment dans l'activation des kinases et la signalisation intracellulaire.
• La protéine se localise dans le cytoplasme, le noyau et la membrane externe des mitochondries.
• Les modifications post-traductionnelles incluent la phosphorylation et l'ADP-ribosylation, et elle forme des liaisons isopeptidiques avec les protéines cibles.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène correspond à l'ubiquitine pleine longueur (1-228), donc l'anticorps peut reconnaître à la fois l'ubiquitine libre et les conjugués d'ubiquitine. En western blot, l'ubiquitine libre est détectée à ~26 kDa, tandis que les protéines polyubiquitinylées apparaissent comme des traînées de haut poids moléculaire.
• Pour le WB, envisagez de traiter les cellules avec un inhibiteur du protéasome (par exemple, MG132) pour accumuler les espèces polyubiquitinylées si vous analysez la dégradation.
• Validez la spécificité avec des contrôles négatifs appropriés, tels qu'une extinction par siRNA de l'ubiquitine.
• Pour l'IHC-P, une récupération antigénique peut être nécessaire ; optimisez la dilution de l'anticorps et les conditions de détection en utilisant des tissus positifs connus.
• Les applications ELISA peuvent bénéficier de tests en formats direct et sandwich selon le type d'échantillon.

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