TrkB Lapin pAb pour WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA - Q16620

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de TrkB

• Codé par le gène NTRK2, TrkB (récepteur des facteurs de croissance BDNF/NT-3, récepteur tyrosine kinase neurotrophique de type 2) est une tyrosine kinase réceptrice qui sert de récepteur à haute affinité pour le facteur neurotrophique dérivé du cerveau (BDNF) et la neurotrophine-4 (NTF4), et se lie à la neurotrophine-3 (NTF3) avec une affinité plus faible (PubMed:15494731, PubMed:7574684). L'épissage alternatif génère de multiples isoformes, notamment la TrkB pleine longueur active sur le plan kinase, la TrkB-T1 tronquée et la TrkB-T-Shc liant Shc. Références associées : PMID:15494731 PMID:7574684
• Suite à la dimérisation induite par le ligand et à l'autophosphorylation, TrkB recrute et active des effecteurs en aval tels que SHC1, FRS2, SH2B1, SH2B2 et PLCG1. Cela déclenche la cascade GRB2-Ras-MAPK (différenciation neuronale et croissance des neurites), la voie PI3K-AKT1 (croissance et survie cellulaires) et la signalisation PLCG1-PKC (plasticité synaptique).
• Via PLCG1, TrkB active également NF-kappa-B, favorisant la transcription de gènes de survie et supprimant l'anoïkis. Il peut médier la signalisation calcique dépendante des neurotrophines dans les cellules gliales.
• La localisation subcellulaire comprend la membrane cellulaire, les membranes des endosomes/endosomes précoces, les projections axonales et dendritiques, le cytoplasme périnucléaire et la densité postsynaptique.
• Dans le SNC, TrkB est exprimé dans le cortex cérébral, l'hippocampe, le thalamus, le plexus choroïde, le cervelet, le tronc cérébral et la moelle épinière. Dans le SNP, on le trouve dans les ganglions crâniens, les ganglions de la racine dorsale et les nerfs sensoriels. TrkB-T1 est également détectée dans le pancréas, les reins et le cœur, tandis que TrkB-T-Shc est principalement neuronale.
• Les modifications post-traductionnelles comprennent la glycosylation N-liée, la formation de liaisons disulfure et la phosphorylation de tyrosine dépendante du ligand. Mots-clés : glycoprotéine, phosphoprotéine, kinase, transmembranaire, épissage alternatif.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène couvre les acides aminés 32–430 du TrkB humain, correspondant au domaine extracellulaire. Cette région devrait reconnaître toutes les isoformes qui partagent la région extracellulaire.
• Pour le transfert Western, le poids moléculaire prédit de la TrkB pleine longueur est de 92 kDa ; cependant, la glycosylation peut entraîner un décalage de la bande vers un poids moléculaire apparent plus élevé. Un gel SDS-PAGE réducteur et une membrane PVDF sont recommandés.
• En immunofluorescence/ICC et IHC-P, les méthodes de démasquage antigénique peuvent améliorer la détection, en particulier dans les tissus fixés au formol et inclus en paraffine. Validez l'anticorps dans des échantillons témoins positifs appropriés (par exemple, tissu cérébral, lignées cellulaires neuronales) et incluez des témoins sans anticorps primaire.
• Puisqu'il s'agit d'un anticorps polyclonal, la cohérence d'un lot à l'autre doit être vérifiée pour les applications quantitatives critiques. Envisagez de l'utiliser comme anticorps de capture ou de détection dans un ELISA avec une optimisation appropriée de l'appariement.

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