Anticorps Polyclonal de Lapin TriMethyl-Histone H4-K20 pour WB/IHC/IF (P62805)

Spécifications et Paramètres Principaux du Produit

Contexte Biologique : Fonction et Localisation de l'Histone H4

L'histone H4 est l'une des histones principales qui constituent le nucléosome, l'unité répétitive fondamentale de la chromatine. Avec les histones H2A, H2B et H3, elle forme un octamère autour duquel environ 147 paires de bases d'ADN sont enroulées, compactant le génome dans le noyau et régulant l'accessibilité de l'ADN. L'histone H4 joue un rôle central dans la régulation de la transcription, la réparation de l'ADN, la réplication de l'ADN et la stabilité chromosomique. La modulation dynamique de la structure de la chromatine est largement réalisée par un ensemble complexe de modifications post-traductionnelles (PTM) sur les queues d'histone, collectivement appelées le « code histone ». Références connexes : UniProt P62805

L'histone H4 est principalement localisée dans le noyau et s'associe aux chromosomes. L'H4 acétylée est également trouvée dans le noyau à des stades spécifiques de la spermatogenèse (spermatides de l'étape 11). Références connexes : UniProt P62805

Le résidu lysine 20 de l'histone H4 (H4K20) est sujet à plusieurs états de méthylation, y compris la mono-, di- et triméthylation. La triméthylation de H4K20 (H4K20me3) est une marqueur de l'hétérochromatine constitutive et est impliquée dans le silencing génique, la réponse aux dommages de l'ADN et la régulation du cycle cellulaire. Cette modification est régulée dynamiquement par des méthyltransférases (par exemple, SUV4-20H1/2) et des déméthylases. De nombreuses autres PTM sur H4 ont été identifiées par spectrométrie de masse et d'autres techniques, soulignant la complexité de la régulation des histones. Références connexes : PMID:12086618, PMID:15964846, PMID:17967882

Guides Expérimentaux et Conseils Techniques

• L'immunogène est un peptide synthétique correspondant à la région triméthylée K20 de l'histone H4 humaine. On s'attend à ce que cet anticorps reconnaisse spécifiquement H4K20me3, mais la réactivité croisée avec d'autres états de méthylation H4 ou l'H4 non modifiée doit être exclue expérimentalement en utilisant des essais de compétition peptidique appropriés ou des modèles de knock-out/knock-down.
• Pour la détection par Western blot (WB), des extraits nucléaires enrichis en histones ou des histones extraites par acide sont recommandés comme type d'échantillon. Optimisez la concentration de l'anticorps primaire (par exemple, commencez à 1:500–1:2000) et utilisez un conjugué d'anticorps secondaire approprié.
• En immunohistochimie (IHC-P), la récupération de l'antigène avec un tampon citrate (pH 6,0) ou un tampon EDTA (pH 8,0) peut améliorer la disponibilité de l'épitope ; optimisez la méthode de récupération de manière empirique.
• Pour l'immunofluorescence (IF/ICC), une perméabilisation avec 0,1–0,5 % de Triton X-100 ou de digitonine est suggérée. Les conditions de fixation (par exemple, 4 % de PFA) peuvent affecter l'accessibilité de l'épitope ; testez différents protocoles.
• Lors de l'utilisation dans des tests ELISA ou dot blot (DB), envisagez d'utiliser des plaques bloquées avec du BSA et un système de détection biotinylé pour une sensibilité accrue.
• Incluez toujours un témoin négatif (par exemple, peptide H4 non modifié ou témoin IgG) et validez la spécificité de l'anticorps dans le système d'échantillon pertinent en utilisant la spectrométrie de masse ou d'autres méthodes orthogonales.
• L'anticorps montre une réactivité croisée prédite à large gamme (Humain, Souris, Rat et autres), mais une validation dans chaque espèce d'intérêt est conseillée.

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