Anticorps monoclonal de lapin anti-TriMethyl-Histone H3-K4 (Q16695 / P68431) pour la recherche épigénétique et les applications ChIP, WB, ELISA

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'histone H3

• L'histone H3 est un composant central du nucléosome, enveloppant et compactant l'ADN en chromatine pour en restreindre l'accessibilité aux machineries transcriptionnelles, de réparation et de réplication. Elle joue un rôle central dans le maintien de la stabilité chromosomique et la régulation de l'expression génique via un ensemble complexe de modifications post-traductionnelles (le "code histone"). Références associées : PMID:17194708
• La protéine H3.1 canonique (codée par de multiples gènes HIST1H3, SWISS P68431) est exprimée de manière dépendante de la réplication dans la plupart des types cellulaires, tandis que le variant spécifique des testicules H3.1t (HIST3H3, SWISS Q16695) est principalement exprimé dans les cellules testiculaires. Les deux se localisent dans le noyau et s'associent aux chromosomes pendant la division cellulaire. Références associées : Gène/Protéine spécifique ; voir UniProt Q16695/P68431
• La triméthylation sur la lysine 4 (H3K4me3) est une marque épigénétique pivot associée aux promoteurs actifs, à la conformation ouverte de la chromatine et à l'initiation transcriptionnelle. Elle est déposée par les méthyltransférases de la famille COMPASS et reconnue par des protéines "lectrices" qui facilitent l'activation génique. Références associées : PMID:16185088
• H3K4me3 coexiste et interagit avec d'autres modifications des histones (par ex. acétylation, phosphorylation, méthylation sur d'autres résidus) pour affiner les états de la chromatine. La dérégulation de cette marque est impliquée dans le cancer, les troubles du développement et les dysfonctionnements immunitaires, en faisant un biomarqueur clé dans la recherche épigénétique et le développement IVD.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène (un peptide synthétique triméthylé autour de K4) a été conçu pour conférer une haute spécificité pour la modification H3K4me3. Pour confirmer la sélectivité, envisagez des tests de compétition par peptide ou un traitement avec des déméthylases d'histone (par ex. LSD1) qui enlèvent les groupes méthyles.
• Pour le Western blot (WB), les protocoles d'extraction d'histones qui enrichissent les protéines nucléaires basiques sont recommandés. La bande attendue est d'environ ~15 kDa ; vérifiez l'identité de la bande en utilisant des contrôles positifs H3K4me3.
• En immunoprécipitation de la chromatine (ChIP), validez l'enrichissement au niveau de gènes cibles connus de H3K4me3 (par ex. promoteur de GAPDH) par qPCR. Incluez des contrôles IgG appropriés pour évaluer le bruit de fond.
• Pour l'immunohistochimie (IHC‑P) et l'immunofluorescence (IF/ICC), les conditions de démasquage antigénique (citrate pH 6 ou EDTA pH 9) peuvent influencer la coloration. Testez une gamme de dilutions sur des tissus positifs et négatifs.
• En raison de la forte conservation de la séquence entre les espèces, une réactivité croisée avec l'humain, la souris, le rat et d'autres vertébrés est attendue. Validez la détection dans votre système d'échantillon spécifique avant toute analyse quantitative.

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