Anticorps polyclonal de lapin anti-histone H3 triméthylé K4 (H3K4me3) – Q16695/P68431 pour ChIP-seq et WB

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'histone H3

L'histone H3 est une protéine d'histone centrale qui, avec H2A, H2B et H4, s'assemble en nucléosome, l'unité répétitive fondamentale de la chromatine. Les nucléosomes compactent l'ADN et régulent son accessibilité à la machinerie cellulaire, jouant un rôle central dans la transcription, la réplication, la réparation et la stabilité chromosomique. Les modifications post-traductionnelles des histones, collectivement appelées « code des histones », contrôlent de manière dynamique la structure de la chromatine et l'expression génique. Références associées : UniProt Q16695/P68431

La triméthylation de la lysine 4 sur l'histone H3 (H3K4me3) est une signature des promoteurs géniques actifs et est étroitement liée à l'initiation et à l'élongation de la transcription. Cette modification est déposée par des méthyltransférases spécifiques et éliminée par des déméthylases, agissant comme un régulateur épigénétique critique dans le développement, la différenciation et la maladie.

L'histone H3 est située dans le noyau et associée aux chromosomes. Il existe de multiples variantes, notamment la forme canonique H3.1 (codée par plusieurs gènes, représentée par P68431) et la variante spécifique aux testicules H3.1t (Q16695). Alors que H3.1 est exprimée de manière ubiquitaire, H3.1t se trouve principalement dans les cellules testiculaires. Références associées : UniProt Q16695

Les queues N-terminales des histones sont soumises à une vaste gamme de modifications — acétylation, méthylation, phosphorylation, et bien d'autres — qui génèrent un paysage régulateur complexe. Des études de cartographie complètes ont répertorié ces modifications, soulignant la nature combinatoire complexe du code des histones. Références associées : PMID:17194708

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Pour le Western blot (WB) et le Dot blot (DB), une bande unique d'environ 15 kDa est attendue. Les lysats riches en histones (par exemple, les protéines nucléaires de HeLa extraites à l'acide) sont recommandés comme contrôles positifs, et le chargement doit être normalisé par rapport à l'histone H3 totale.
• En immunoprécipitation de la chromatine (ChIP) et ChIP-seq, optimisez les conditions de réticulation et de sonication pour le type cellulaire spécifique. Incluez des loci connus positifs pour H3K4me3 (par exemple, le promoteur GAPDH) et des régions de contrôle négatif pour valider l'enrichissement.
• Pour l'immunohistochimie sur coupes incluses en paraffine (IHC-P), la récupération d'antigène (par exemple, tampon citrate, pH 6,0) est essentielle. Un marquage principalement nucléaire doit être observé, l'intensité du signal reflétant l'activité transcriptionnelle du tissu.
• En ELISA et autres tests sur plaque, envisagez d'utiliser un peptide H3K4 triméthylé comme contrôle positif et un peptide non modifié ou monométhylé pour confirmer la spécificité de la modification.
• Comme pour tout anticorps polyclonal, la cohérence lot à lot doit être vérifiée par titrage sur des échantillons connus comme positifs. La réactivité croisée avec d'autres espèces est prédite sur la base de la conservation élevée des séquences chez les vertébrés, mais une validation dans le système d'échantillonnage pertinent est conseillée.

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