Anticorps monoclonal de lapin contre l'histone H3 triméthylée au niveau de K27 (Q16695/P68431) pour applications WB, ChIP et CUT&Tag

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'histone H3

L'histone H3 est une protéine histone centrale qui, avec H2A, H2B et H4, forme le nucléosome, l'unité répétitive fondamentale de la chromatine. Les nucléosomes enroulent et compactent l'ADN, contrôlant ainsi l'accessibilité de l'information génétique aux machineries cellulaires responsables de la transcription, de la réplication et de la réparation. Ce rôle central fait des histones des régulateurs clés de la stabilité génomique et de l'expression génique.

La polyvalence fonctionnelle des histones est largement médiée par un large éventail de modifications post-traductionnelles (MPT), collectivement appelées « code histone ». Ces modifications, incluant l'acétylation, la méthylation, la phosphorylation et d'autres, se produisent sur des résidus spécifiques et régissent la dynamique de la chromatine. Parmi elles, la triméthylation de l'histone H3 au niveau de la lysine 27 (H3K27me3) est une marque répressive bien caractérisée, associée à la formation d'hétérochromatine facultative et au silençage génique à long terme.

Cet anticorps monoclonal de lapin a été généré contre un peptide synthétique triméthylé couvrant le résidu K27 de l'histone H3 humaine (basé sur la séquence NP_003520.1). Il reconnaît spécifiquement l'histone H3 uniquement lorsqu'elle est triméthylée au niveau de K27, permettant une détection précise de cette marque épigénétique dans de nombreux tests expérimentaux.

Références associées : PMID:16267050, PMID:17194708

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L'immunogène étant un peptide synthétique triméthylé autour de K27, cet anticorps est attendu pour avoir une haute spécificité pour l'état triméthylé. Il est recommandé de vérifier la spécificité par dot blot ou test de compétition peptidique en utilisant des peptides non modifiés, mono-, di- et triméthylés.
• Pour le Western blot (WB), il est recommandé d'utiliser des extraits nucléaires riches en histones ou des histones extraits par voie acide. La bande prédite est d'environ 15 kDa. Utilisez des contrôles de chargement appropriés (par exemple, un anticorps contre l'histone H3 totale ou contre l'extrémité C-terminale de l'histone H3) pour normaliser le chargement des protéines.
• En immunoprécipitation de la chromatine (ChIP), cet anticorps peut être utilisé pour enrichir les régions chromatiniennes marquées par H3K27me3. Optimisez la fragmentation de la chromatine et la concentration d'anticorps pour chaque type cellulaire. Incluez des régions contrôles positives (par exemple, les loci des gènes HOX) et négatives (par exemple, les promoteurs des gènes domestiques) dans l'analyse qPCR.
• Pour la technique CUT&Tag (Cleavage Under Targets & Tagmentation), l'anticorps peut servir d'anticorps primaire pour le ciblage et le clivage in situ. Suivez le protocole du fabricant pour les approches basées sur billes ou de liaison directe. L'analyse à l'échelle du génome peut révéler la distribution de H3K27me3 sur l'ensemble du génome.
• En immunofluorescence (IF/ICC) et immunohistochimie (IHC-P), une coloration nucléaire est attendue. Optimisez les conditions de fixation (par exemple, 4 % de PFA pour l'IF, coupes incluses en paraffine fixées au formol pour l'IHC) et de perméabilisation. Le blocage avec du sérum/BSA peut réduire le bruit de fond.
• Toujours valider l'anticorps dans le système d'échantillon et le contexte d'application appropriés. Réalisez une titration de l'anticorps et incluez des contrôles appropriés pour garantir des résultats reproductibles.

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