Anticorps monoclonal de souris TriMéthyl-Histone H3-K27 (P68431) pour ChIP, CUT&Tag, WB et IHC

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'histone H3.1

• L'histone H3.1 est un composant central du nucléosome, l'unité de base répétitive de la chromatine. Les nucléosomes enroulent et compactent l'ADN, régulant l'accès à l'information génétique.
• En tant qu'histone clé, H3 joue un rôle central dans la régulation de la transcription, la réparation de l'ADN, la réplication de l'ADN et la stabilité chromosomique. L'accessibilité de l'ADN est contrôlée par un ensemble complexe de modifications post-traductionnelles (MPT), collectivement appelé « code histone », qui implique également le remodelage des nucléosomes.
• La queue N-terminale de l'histone H3 est soumise à un grand nombre de MPT, notamment la méthylation, l'acétylation, la phosphorylation, la citrullination et d'autres. Ces marques sont dynamiques et orchestrent divers processus liés à la chromatine.
• La triméthylation de la lysine 27 (H3K27me3) est une marque répressive bien caractérisée associée au silence génique et à la formation d'hétérochromatine, déposée principalement par le complexe répressif Polycomb 2 (PRC2).
• Au niveau sous-cellulaire, l'histone H3.1 est localisée dans le noyau et s'associe aux chromosomes.

Références associées : UniProt P68431

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Cet anticorps a été obtenu contre un peptide triméthylé synthétique couvrant les résidus autour de K27. Il est attendu qu'il reconnaisse spécifiquement la forme triméthylée de l'histone H3 au niveau de la lysine 27 et qu'il ne présente pas de réaction croisée avec les états non modifiés ou autres états de méthylation. Pensez à valider la spécificité avec des essais de compétition par peptide ou des contrôles positifs/négatifs adaptés.
• Pour l'analyse par Western blot, l'extraction des histones via des protocoles d'extraction acide améliore souvent le signal et réduit le bruit de fond. Utilisez un contrôle de charge tel que l'histone H3 totale ou l'histone H4.
• Pour l'immunoprécipitation de la chromatine (ChIP) et CUT&Tag, optimisez la concentration d'anticorps et les conditions de réticulation. La haute spécificité pour H3K27me3 le rend adapté à la cartographie de cette marque répressive à l'échelle du génome.
• En immunohistochimie (IHC-P), une récupération d'antigène (par exemple, récupération épitopique induite par la chaleur) peut être nécessaire pour exposer l'épitope. Validez le profil de coloration dans le tissu et le type cellulaire concerné.
• Pour l'immunofluorescence (IF/ICC), les conditions de fixation et de perméabilisation doivent être choisies avec soin pour préserver l'architecture de la chromatine et l'accessibilité de l'épitope.
• Bien que cet anticorps soit fourni pour de multiples applications, testez systématiquement au préalable les dilutions et les conditions dans votre système expérimental spécifique pour garantir une performance optimale.

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