Anticorps polyclonal de lapin anti-Histone H3 tri-méthylée sur K14 (Q16695 / P68431) pour WB, IF, ELISA

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'Histone H3

L'Histone H3 est un composant central du nucléosome, l'unité fondamentale de la chromatine. Avec H2A, H2B et H4, elle forme le cœur histone octamérique autour duquel l'ADN s'enroule, compactant le génome et régulant l'accessibilité de l'ADN. Ce rôle structurel est central pour des processus tels que la régulation de la transcription, la réparation de l'ADN, la réplication de l'ADN et la stabilité chromosomique. La fonction de l'histone H3 est contrôlée de manière dynamique par un ensemble complexe de modifications post-traductionnelles (MPT), incluant l'acétylation, la méthylation, la phosphorylation et d'autres, collectivement appelées le "code histone". Ces modifications altèrent la structure de la chromatine et servent de plateformes de liaison pour des protéines effectrices.

L'Histone H3 se localise principalement dans le noyau et est distribuée le long des chromosomes. Il existe différents variants de H3 : les variants canoniques H3.1 et H3.2, le variant H3.3 indépendant de la réplication, et le variant spécifique des testicules H3.1t (codé par H3-4/HIST3H3). Selon UniProt, le variant H3.1t (Q16695) est spécifiquement exprimé dans les cellules testiculaires, tandis que le variant majeur H3.1 (P68431) est ubiquitaire. Les deux isoformes partagent un haut degré d'identité de séquence et subissent des MPT similaires.

Le résidu K14 de l'histone H3 est un site bien connu de multiples MPT, incluant l'acétylation (H3K14ac) et la méthylation. La tri-méthylation de H3K14 (H3K14me3) est une modification récemment reconnue qui pourrait jouer un rôle dans la régulation de la chromatine et l'expression génique. Cet anticorps a été produit contre un peptide synthétique couvrant l'extrémité N-terminale (aa1-100), la région qui fait saillie du nucléosome et est la plus fortement modifiée. Il est conçu pour détecter spécifiquement la forme tri-méthylée de K14.

Références associées : UniProt Q16695 UniProt P68431

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène correspond à l'extrémité N-terminale (aa 1-100) de l'histone H3 humaine. Cette région est hautement conservée, ce qui explique la large prédiction de réactivité croisée. Cependant, comme cet anticorps cible une MPT spécifique (tri-méthyl K14), une validation dans le système cellulaire ou tissulaire d'intérêt est recommandée pour confirmer la réactivité et la spécificité.
• Pour le Western blot, les histones sont fortement liées à l'ADN nucléaire ; ainsi, des protocoles d'extraction acide ou d'enrichissement en histones peuvent améliorer la détection. Utilisez des contrôles de charge appropriés (par exemple, H3 ou H4 totale) pour normaliser les différences de chargement.
• Pour l'immunofluorescence/ICC, une fixation au paraformaldéhyde suivie d'une perméabilisation au Triton X-100 est généralement efficace pour les cibles nucléaires. Cependant, l'épitope peut être sensible à une sur-fixation ; optimisez le temps de fixation et la concentration du détergent.
• Comme les anticorps spécifiques d'une MPT peuvent présenter une certaine réactivité croisée avec d'autres modifications, envisagez d'utiliser des tests de compétition par peptide (par exemple, pré-incubation de l'anticorps avec un peptide tri-méthyl K14 versus des peptides non modifiés ou mono/di-méthylés) pour vérifier la spécificité dans vos conditions expérimentales.
• L'ELISA est listé comme une application ; pour le revêtement, des peptides d'histone ou des nucléosomes purifiés peuvent être utilisés. Assurez-vous que le revêtement expose adéquatement l'épitope K14me3.

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