mAb de lapin anti-topoisomérase II alpha/TOP2A pour WB, IF/ICC, IF-P, IHC-P, ELISA - P11388

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de la topoisomérase II alpha

• La topoisomérase 2-alpha de l’ADN (TOP2A) est une enzyme clé de décaténation qui modifie la topologie de l’ADN en générant des cassures transitoires double brin, en faisant passer un brin intact à travers la cassure, puis en le ressoudant. Références associées : PMID:17567603 PMID:18790802 PMID:22013166
• Cette enzyme est essentielle pour résoudre les enchevêtrements et les superenroulements de l’ADN qui apparaissent lors de la réplication, de la transcription, de la ségrégation des chromosomes et d’autres processus nécessitant une manipulation topologique de l’ADN.
• TOP2A appartient à la famille des topoisomérases de type II et existe sous forme d’homodimère ; elle est également connue sous le nom d’isozyme alpha de la topoisomérase II de l’ADN.
• La protéine se localise dans le cytoplasme, le nucléoplasme et le nucléole, ce qui est cohérent avec ses fonctions dans le métabolisme nucléaire de l’ADN et l’organisation des chromosomes mitotiques.
• Les modifications post-traductionnelles comprennent l’acétylation, la phosphorylation et l’ubiquitination, comme l’indiquent les mots-clés d’UniProt ; ces modifications peuvent réguler l’activité enzymatique, la stabilité et la localisation cellulaire.
• TOP2A est largement exprimée dans des tissus tels que les amygdales, la rate, les ganglions lymphatiques, le thymus, la peau, le pancréas, les testicules, le côlon, les reins, le foie, le cerveau et les poumons. Une expression élevée est observée dans les lymphomes de haut grade, les tumeurs pulmonaires épidermoïdes et les séminomes.
• Elle pourrait également jouer un rôle dans la régulation du rythme circadien en influençant la durée de la période des oscillations transcriptionnelles de BMAL1 (par similarité).

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L’immunogène est un peptide synthétique correspondant aux acides aminés 1431 à 1531 de la région C-terminale de la TOP2A humaine, une région pouvant conférer une spécificité d’isoforme. Il est recommandé de vérifier la spécificité à l’aide de contrôles par extinction ou invalidation génique.
• Pour le Western blot, le poids moléculaire prédit de la TOP2A est d’environ 174 kDa. Utilisez un gel d’acrylamide à faible pourcentage (par exemple 6 à 8 %) et prolongez les temps de transfert afin d’assurer un transfert efficace de cette protéine de poids moléculaire élevé.
• En immunofluorescence (IF/ICC) et en immunohistochimie (IHC-P), des profils de marquage nucléaire et nucléolaire sont attendus. Validez-les en les comparant à des tissus positifs connus tels que les amygdales, la rate ou les lymphomes de haut grade.
• Pour l’ELISA, assurez-vous que l’antigène de revêtement présente correctement la région épitopique ; des tests de compétition par peptide peuvent contribuer à confirmer la spécificité de liaison.
• En tant qu’anticorps monoclonal recombinant de lapin, il offre une forte affinité et une bonne reproductibilité ; toutefois, les dilutions de travail optimales doivent être déterminées empiriquement pour chaque test et chaque type d’échantillon.

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