Anticorps monoclonal de lapin anti-Smac/Diablo pour WB, IF/ICC, ELISA - Q9NR28

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de Smac/Diablo

• Diablo (protéine de liaison directe aux IAP avec un pI bas), également connu sous le nom de Second activateur de caspases dérivé des mitochondries (SMAC), est une protéine pro-apoptotique qui favorise l'apoptose en activant les caspases dans la voie cytochrome c/Apaf-1/caspase-9.
• Il agit en s'opposant à l'activité inhibitrice des protéines inhibitrices de l'apoptose (IAP), inhibant spécifiquement la liaison de BIRC6/BRUCE aux caspases. Références associées : PMID:15200957 PMID:36758104 PMID:36758105
• Diablo atténue la stabilité et l'activité inhibitrice de l'apoptose de XIAP/BIRC4 en favorisant son ubiquitination et sa dégradation protéasomale, et perturbe l'interaction de XIAP avec la caspase-9 clivée pour activer la caspase-3.
• La protéine est localisée dans la mitochondrie et est libérée dans le cytosol en réponse à des stimuli apoptotiques.
• Elle est exprimée de manière ubiquitaire, avec les niveaux les plus élevés dans les testicules, et également fortement exprimée dans le cœur, le foie, le rein, la rate, la prostate et l'ovaire ; moins exprimée dans le cerveau, les poumons, le thymus et les leucocytes sanguins périphériques.
• L'épissage alternatif produit plusieurs isoformes, et des mutations dans ce gène sont associées à la surdité non syndromique (DFNA64).
• Les modifications post-traductionnelles comprennent la conjugaison à l'ubiquitine, et la protéine contient un peptide de transit pour le ciblage mitochondrial.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène correspond aux acides aminés 56–239 de Smac/Diablo humain mature, couvrant la région fonctionnelle après le traitement mitochondrial ; il est adapté pour détecter la protéine mature endogène (~23 kDa, forme traitée) et éventuellement le précurseur de pleine longueur.
• Pour le transfert Western (WB), envisagez d'utiliser des lysats mitochondriaux ou cellulaires totaux ; le poids moléculaire prédit du précurseur de pleine longueur est de 27 kDa, tandis que la forme mature après clivage du peptide de transit migre à environ 23 kDa. Optimisez en conséquence les conditions de lyse et de chargement.
• En immunofluorescence/immunocytochimie (IF/ICC), la localisation mitochondriale peut être observée dans des conditions d'état stable ; après induction de l'apoptose, la coloration peut se déplacer vers le cytosol.
• Pour l'ELISA, l'anticorps peut être utilisé pour capturer ou détecter Smac/Diablo recombinant ou endogène ; il est recommandé de l'associer à un anticorps de détection dirigé contre un épitope non chevauchant pour une sensibilité optimale.
• La réactivité croisée avec la souris et le rat est spécifiée ; lorsque vous travaillez avec ces espèces, validez l'anticorps dans le système tissulaire ou cellulaire pertinent pour confirmer la réactivité et la spécificité.

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