Anticorps monoclonal de lapin contre la protéine Spike S1 du SARS-CoV-2 pour WB, IF/ICC, ELISA - P0DTC2

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la protéine Spike S1 du SARS-CoV-2

• La glycoprotéine de spike (S) médie l'entrée du virus en se liant au récepteur hôte de l'enzyme de conversion de l'angiotensine 2 (ACE2), une étape clé de l'initiation de l'infection. Références associées : PMID:32142651 PMID:32155444 PMID:33607086
• Des récepteurs alternatifs tels que la neuropiline-1 (NRP1)/NRP2, le récepteur de l'asialoglycoprotéine 1 (ASGR1) et les intégrines peuvent également faciliter l'entrée du virus, ce qui peut contribuer au tropisme pour les cellules épithéliales olfactives exprimant de faibles niveaux d'ACE2. Références associées : PMID:33082294 PMID:33082293 PMID:35150743 PMID:34837059
• La protéine S est clivée par les protéases hôtes en sous-unités S1 (liaison au récepteur) et S2 (fusion membranaire) ; le clivage au niveau du site S2' par TMPRSS2 ou la cathepsine L est essentiel pour l'activation de la fusion. Références associées : PMID:32142651 PMID:32703818 PMID:34159616 PMID:34561887
• Après le clivage, la sous-unité S2 subit un important remaniement conformationnel passant d'un état pré-fusion à une épingle à cheveux trimérique post-fusion, rapprochant les membranes virale et cellulaire pour permettre la fusion.
• Au niveau subcellulaire, la protéine de spike se localise sur la membrane de la virion, la membrane du compartiment intermédiaire réticulum endoplasmique-Golgi (ERGIC) de l'hôte et la membrane cellulaire de l'hôte, reflétant son cycle de trafic et de bourgeonnement.
• La protéine S possède des propriétés de type superantigène et participe à l'immunoévasion virale, inhibant les réponses immunitaires innées de l'hôte et neutralisant les facteurs de restriction comme la tetherine.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Conception de l'immunogène : L'anticorps a été obtenu contre un peptide synthétique couvrant les acides aminés 200 à 300 de la sous-unité S1 (YP_009724390.1), une région qui chevauche le domaine de liaison au récepteur. Cet épitope est conservé chez de nombreux isolats de SARS-CoV-2, ce qui suggère une large réactivité.
• Pour le Western blot (WB), la protéine de spike pleine longueur a un poids moléculaire prédit d'environ 141 kDa ; cependant, la détection de produits de clivage de S1 (environ 80 kDa) peut se produire selon la préparation de l'échantillon. Validez l'essai en utilisant des lysats de cellules infectées par le SARS-CoV-2 ou de la protéine S1 recombinante.
• En immunofluorescence (IF/ICC), prévoyez des protocoles de perméabilisation pour détecter la protéine de spike intracellulaire dans les cellules infectées. La co-coloration avec des marqueurs d'organites peut aider à étudier la localisation subcellulaire.
• Pour les applications ELISA, l'anticorps peut être utilisé comme réactif de capture ou de détection pour la quantification de la protéine S1 recombinante ou des particules virales. Le titre et la réactivité croisée doivent être confirmés vis-à-vis des variants pertinents du SARS-CoV-2.
• Comme pour tous les anticorps de recherche, les dilutions de travail optimales doivent être déterminées empiriquement pour chaque essai et type d'échantillon.

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