mAb de lapin anti-RBD du Spike SARS-CoV-2 (N501Y) pour WB, ELISA - P0DTC2

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du RBD du Spike SARS-CoV-2 (N501Y)

• La glycoprotéine spike (S) du SARS-CoV-2 est une protéine de fusion de classe I trimérique qui médie l'attachement viral et l'entrée dans les cellules hôtes par interaction avec le récepteur de l'enzyme de conversion de l'angiotensine 2 (ACE2). Références associées : PMID:32142651, PMID:32155444, PMID:33607086
• Elle est synthétisée sous forme de protéine précurseur puis clivée en sous-unités S1 et S2 ; la sous-unité S1 contient le domaine de liaison au récepteur (RBD) qui se lie à l'ACE2, tandis que la sous-unité S2 médie la fusion membranaire.
• Le clivage de la sous-unité S2 au site S2' par les protéases hôtes TMPRSS2 (à la surface cellulaire) ou la cathepsine L (dans les endosomes) expose le peptide de fusion et déclenche des changements conformationnels irréversibles nécessaires à l'entrée virale. Références associées : PMID:32142651, PMID:32703818, PMID:34159616, PMID:34561887
• La protéine spike peut utiliser d'autres récepteurs d'entrée, notamment la neuropiline-1 (NRP1) et la NRP2, les intégrines et le récepteur 1 de l'asialoglycoprotéine (ASGR1), ce qui peut influencer le tropisme tissulaire. Références associées : PMID:33082294, PMID:33082293, PMID:35150743, PMID:34837059
• Structurellement, le domaine de la tige de la protéine S contient trois charnières qui confèrent une grande liberté d'orientation au domaine de la tête, une caractéristique importante pour la liaison au récepteur. Référence associée : PMID:32817270
• Elle est fortement glycosylée et contient plusieurs ponts disulfures ; un site de palmitoylation est présent dans la queue cytoplasmique. La protéine spike est localisée sur la membrane du virion, la membrane du compartiment intermédiaire ER-Golgi hôte et la membrane de la cellule hôte.
• Mots-clés associés : immunoévasion virale, inhibition de la réponse immunitaire innée de l'hôte et activité de superantigène, ce qui indique des rôles au-delà de l'entrée cellulaire.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Cet anticorps a été généré contre un peptide synthétique couvrant les acides aminés 450 à 550 du RBD du Spike SARS-CoV-2 (mutant N501Y) et reconnaît donc probablement un épitope situé dans cette région ; confirmez la spécificité vis-à-vis du type sauvage et d'autres variants si des données de réactivité croisée sont nécessaires.
• Pour le Western blot (WB), utilisez des conditions réductrices et envisagez une déglycosylation pour améliorer la détection de la protéine spike complète d'environ 141 kDa ; validez avec du RBD recombinant ou un trimère de spike comme contrôle positif.
• Dans les applications ELISA, cet anticorps monoclonal peut servir de réactif de capture ou de détection ; la concentration de revêtement et les conditions de blocage adéquates doivent être optimisées dans la matrice d'échantillon concernée.
• En raison du rôle essentiel du RBD dans l'attachement à la cellule hôte, cet anticorps peut être utile pour des études de neutralisation ou des tests de liaison compétitive, mais ces utilisations nécessitent une validation fonctionnelle indépendante.

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