mAb Rat anti-Souris CD45R/B220 pour cytométrie en flux - P06800

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de CD45R/B220 (Protéine tyrosine phosphatase C de type récepteur)

• CD45R/B220, codé par le gène Ptprc, est une protéine tyrosine phosphatase C de type récepteur (PTPRC), également connue sous le nom d'antigène commun des leucocytes (L-CA), d'antigène lymphocyte 5 (Ly-5) et de T200. Plusieurs isoformes sont générées par épissage alternatif, produisant des variants de poids moléculaires différents (par exemple 130, 140, 144 kDa).
• PTPRC agit comme un régulateur positif essentiel de l'activation des lymphocytes T : son premier domaine phosphatase possède une activité enzymatique, tandis que le second module la spécificité vis-à-vis des substrats. Après la liaison du récepteur des lymphocytes T, il recrute et déphosphoryle des molécules de signalisation telles que SKAP1 et FYN (par similarité).
• Il déphosphoryle également la kinase de la famille Src LYN, modulant ainsi l'activité de la kinase LYN et influençant les cascades de signalisation en aval dans les lymphocytes.
• Au niveau sous-cellulaire, PTPRC est localisée sur la membrane cellulaire, enrichie dans les radeaux lipidiques membranaires, et se concentre à la synapse immunologique entre les lymphocytes T et les cellules présentatrices d'antigène.
• PTPRC interagit avec CLEC10A sur les cellules dendritiques immatures à l'interface entre lymphocytes T et cellules dendritiques ; cette interaction reconnaît CD45 portant l'antigène Tn sur les lymphocytes T effecteurs, ajustant le seuil d'activation des lymphocytes T pour limiter l'autoréactivité.
• La protéine subit des glycosylations et des phosphorylations, comme l'indiquent les mots-clés Glycoprotéine et Phosphoprotéine. C'est une protéine transmembranaire de type I avec un peptide signal, un grand domaine extracellulaire, une seule hélice transmembranaire et deux domaines phosphatase intracellulaires.
• Chez la souris, CD45R/B220 est majoritairement exprimé sur les lymphocytes B et un sous-ensemble de lymphocytes T, ce qui en fait un marqueur classique des lignées B dans les études immunologiques.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Pour la cytométrie en flux, titrez l'anticorps conjugué à l'pour déterminer la concentration optimale pour votre type cellulaire et votre protocole de coloration spécifiques, car une titration appropriée permet de réduire la liaison non spécifique.
• Incluez des contrôles d'isotype appropriés (IgG de rat conjuguées au même fluorophore) pour définir les paramètres de compensation et de sélection dans les panneaux multicolores.
• Validez la performance de l'anticorps sur des populations cellulaires positives et négatives connues (par exemple, les splénocytes de souris où les lymphocytes B sont CD45R/B220+ et les sous-ensembles de lymphocytes T sont majoritairement négatifs).
• En raison du grand domaine extracellulaire et de la présence de plusieurs isoformes, assurez-vous que l'immunogène recombinant correspond à l'épitope reconnu par ce clone si la réactivité croisée entre isoformes est essentielle.
• Conservez l'anticorps à 2–8°C à l'abri de la lumière ; évitez les cycles de congélation-décongélation répétés pour maintenir la stabilité du conjugué.

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