Anticorps monoclonal de lapin anti-CD8a de souris pour cytométrie en flux - P01731

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de CD8a

• CD8a (chaîne alpha de la glycoprotéine de surface des lymphocytes T CD8), également appelée Lyt-2, est une glycoprotéine membranaire intégrale appartenant à la superfamille des immunoglobulines. Elle joue un rôle essentiel dans l’immunité adaptative en servant de corécepteur aux molécules du CMH de classe I sur les lymphocytes T.
• Sur les lymphocytes T, CD8a forme un hétérodimère avec CD8b et interagit simultanément avec le récepteur des lymphocytes T (TCR) et les complexes CMH de classe I:peptide présents sur les cellules présentatrices d’antigènes, renforçant ainsi l’interaction et permettant l’activation des lymphocytes T.
• Lors de l’engagement du CMH de classe I, CD8a recrute la kinase de la famille Src LCK vers le complexe TCR-CD3, déclenchant des cascades de phosphorylation qui conduisent à la production de lymphokines, à la motilité cellulaire, à l’adhésion et à l’activation des lymphocytes T cytotoxiques (CTL).
• Dans les cellules tueuses naturelles (NK), les homodimères de CD8a confèrent un avantage de survie en facilitant la conjugaison et la lyse séquentielle de plusieurs cellules cibles, indépendamment de sa fonction de corécepteur sur les lymphocytes T.
• La signalisation de CD8a favorise la survie et la différenciation des lymphocytes activés en lymphocytes T CD8+ mémoire, contribuant ainsi à la mémoire immunologique à long terme.
• CD8a est une protéine transmembranaire localisée dans la membrane cellulaire, comprenant un peptide signal, un domaine extracellulaire de type immunoglobuline et une queue cytoplasmique palmitoylée.
• La protéine subit diverses modifications post-traductionnelles, notamment la N-glycosylation, la formation de ponts disulfure et la palmitoylation, qui sont essentielles à sa stabilité, à son repliement et à son ancrage membranaire.
• L’épissage alternatif du gène Cd8a produit plusieurs isoformes, susceptibles de moduler son expression et sa fonction dans différents types cellulaires.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L’immunogène (acides aminés 28–196 de CD8a de souris) correspond à la région extracellulaire, ce qui rend ce conjugué adapté à la détection de CD8a à la surface cellulaire par cytométrie en flux sans nécessiter de perméabilisation.
• Pour la cytométrie en flux, effectuez une titration de l’anticorps afin de déterminer la concentration optimale pour votre type cellulaire et votre protocole de marquage spécifiques. Incluez un contrôle d’isotype approprié ainsi qu’un discriminateur cellules vivantes/mortes pour garantir une stratégie de gating précise.
• Incubez avec l’anticorps pendant 20–30 minutes sur glace et à l’obscurité afin de minimiser l’internalisation de l’antigène et le photoblanchiment du fluorophore. Lavez soigneusement les cellules pour réduire les liaisons non spécifiques.
• CD8a est exprimée sur les lymphocytes T cytotoxiques et des sous-populations de cellules NK ; l’anticorps peut donc être utilisé pour identifier et phénotyper ces populations dans les tissus lymphoïdes et le sang de souris.
• En tant qu’anticorps monoclonal de lapin, ce réactif offre généralement une grande homogénéité entre les lots et un faible bruit de fond, mais validez toujours ses performances dans votre propre système d’échantillons.

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