anticorps de lapin anti-CD68 de souris mAb pour IF/ICC et FC - P31996

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de CD68

• CD68, également connu sous les noms de macrosialine, Lamp4, gp110 ou Scard1, est une protéine transmembranaire fortement glycosylée appartenant à la famille des glycoprotéines membranaires associées aux lysosomes/endosomes (LAMP).
• Il est principalement exprimé dans les macrophages tissulaires et, dans une moindre mesure, dans les cellules dendritiques, constituant ainsi un marqueur classique de ces types de cellules phagocytaires.
• CD68 joue un rôle dans les activités phagocytaires, en participant au métabolisme lysosomal intracellulaire et en médiant les interactions extracellulaires cellule-cellule et cellule-agent pathogène.
• La protéine se lie à des lectines ou sélectines spécifiques des tissus et des organes, facilitant le recrutement de sous-populations de macrophages vers des sites spécifiques de l’organisme.
• CD68 est rapidement recyclé entre les endosomes, les lysosomes et la membrane plasmique, un processus qui pourrait permettre aux macrophages de se déplacer sur des substrats portant des sélectines ou sur d’autres cellules.
• Au niveau subcellulaire, CD68 est localisé sur les membranes des endosomes, les membranes des lysosomes et la membrane cellulaire, ce qui est cohérent avec son trafic dynamique et ses rôles fonctionnels.
• La protéine contient un peptide signal, un vaste domaine luminal/extracellulaire comportant des répétitions de type mucine, une hélice transmembranaire unique et une courte queue cytoplasmique ; elle est également soumise à un épissage alternatif et à la formation de liaisons disulfure.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• Pour l’immunofluorescence (IF/ICC), envisagez d’inclure une étape de perméabilisation (par exemple avec du Triton X-100 ou de la saponine) afin de détecter les pools intracellulaires de CD68 dans les lysosomes/endosomes, puisque la protéine réside dans ces compartiments.
• Pour la cytométrie en flux (FC), testez des protocoles sur cellules vivantes ainsi que des protocoles avec fixation/per­méabilisation afin de détecter l’expression de CD68 localisée à la surface et l’expression totale. Titrer l’anticorps afin de déterminer la concentration de marquage optimale pour votre type cellulaire et vos conditions expérimentales spécifiques.
• Utilisez des contrôles d’isotype appropriés et des contrôles « fluorescence moins un » (FMO) afin de confirmer la spécificité du marquage, en particulier lors de l’analyse de populations de macrophages et de cellules dendritiques.
• Comme l’immunogène couvre les acides aminés 21 à 291 de CD68 de souris (couvrant le domaine extracellulaire/luminal), l’anticorps devrait reconnaître la protéine native dans des conditions dénaturantes comme dans des conditions natives ; toutefois, confirmez ses performances dans votre application spécifique au moyen d’expériences pilotes.

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