Anticorps monoclonal Lapin anti-Souris CD45 pour IF/ICC et FC - P06800

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de CD45

• CD45 (PTPRC) est une tyrosine-protéine phosphatase de type récepteur essentielle à l'activation des lymphocytes T via le récepteur antigénique, agissant comme un régulateur positif de la coactivation des lymphocytes T lors de la liaison à DPP4.
• La protéine contient deux domaines phosphatase : le premier possède une activité enzymatique intrinsèque, tandis que le second influence la spécificité du substrat du premier.
• L'épissage alternatif génère de multiples isoformes, dont B220, un marqueur bien connu des lymphocytes B et de certains sous-ensembles de lymphocytes T activés.
• CD45 se localise principalement à la membrane cellulaire, enrichie dans les radeaux membranaires et au niveau de la synapse immunologique, où elle module la signalisation.
• Lors de l'engagement du récepteur des lymphocytes T, CD45 recrute et déphosphoryle des effecteurs en aval tels que SKAP1 et FYN, et module l'activité de LYN.
• L'interaction avec CLEC10A sur les cellules dendritiques immatures au site de contact des lymphocytes T reconnaît le CD45 porteur de l'antigène Tn, aidant à affiner les seuils d'activation des lymphocytes T et à limiter l'auto-réactivité.
• La protéine est largement glycosylée et phosphorylée, et est classée comme une protéine membranaire de type I à passage unique avec un peptide signal, des régions en tandem répétées et une hélice transmembranaire.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène englobe le domaine extracellulaire (acides aminés 26–566) de la souris CD45, couvrant la région où se produit l'épissage alternatif spécifique à l'isoforme ; l'anticorps peut donc reconnaître plusieurs isoformes de CD45.
• Pour la cytométrie en flux, envisagez de titrer l'anticorps sur une population cellulaire pertinente (par exemple, des splénocytes de souris) pour déterminer le rapport signal/bruit optimal. Utilisez des contrôles appropriés (contrôle isotype, fluorescence moins un) pour gater précisément les leucocytes CD45-positifs.
• En immunofluorescence (IF/ICC), la perméabilisation peut ne pas être nécessaire pour la coloration de surface du CD45, mais les conditions de fixation et de perméabilisation doivent être optimisées pour la co-coloration de marqueurs intracellulaires. Utilisez un ensemble de filtres compatible avec le rouge lointain (par exemple, ligne laser 647 nm) pour la détection.
• Bien que validé pour IF/ICC et FC, l'anticorps peut être adapté à d'autres applications ; cependant, les utilisateurs finaux doivent valider les performances dans leur système de test spécifique avec le type d'échantillon pertinent.

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