Anticorps monoclonal de lapin anti-souris CD23 conjugué pour la cytométrie en flux - P20693

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du CD23

• Le CD23, également connu sous le nom de Fc-epsilon-RII ou récepteur Fc de faible affinité pour les immunoglobulines epsilon, est une protéine transmembranaire de type II qui agit comme un récepteur pour les IgE et le CR2/CD21. Il existe sous deux isoformes (CD23a et CD23b) générées par épissage alternatif, différant par leurs domaines cytoplasmiques.
• Sur les lymphocytes B, le CD23 est un régulateur clé de la synthèse des IgE et de la différenciation des lymphocytes B. Il médie la capture d'antigène dépendante des IgE et leur présentation ultérieure aux lymphocytes T, influençant ainsi l'immunité humorale.
• Dans les macrophages, la liaison des IgE et la réticulation de l'antigène via le CD23 déclenchent l'élimination intracellulaire des parasites via l'activation de la voie L-arginine-oxyde nitrique.
• Le CD23 se localise principalement à la membrane cellulaire mais peut également être libéré sous forme de récepteur soluble par clivage protéolytique, agissant comme une molécule sécrétée qui module davantage les réponses immunitaires.
• La protéine subit des modifications post-traductionnelles incluant une glycosylation N-liée, une palmitoylation et la formation de ponts disulfure. Elle contient également un domaine lectine de type C et un site de liaison au calcium.
• Comme indiqué par les mots-clés UniProt, le CD23 est une lipoprotéine, un protéoglycane et une protéine liant les IgE, soulignant ses rôles biochimiques divers et son association membranaire.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène utilisé pour cet anticorps était une protéine de fusion recombinante couvrant les acides aminés 50-331 du CD23 de souris. Cette région englobe le domaine lectine extracellulaire, garantissant une reconnaissance spécifique de la protéine native.
• L'anticorps est directement conjugué à l', un fluorophore rouge lointain compatible avec les instruments de cytométrie en flux courants. Son profil d'excitation/émission (∼686/713 nm) permet une bonne séparation par rapport aux autres colorants courants comme le FITC, le PE ou l'APC.
• Pour la cytométrie en flux, envisagez de tester l'anticorps à une gamme de dilutions (par exemple, 0,5–5 µg/mL) sur des splénocytes de souris ou des leucocytes sanguins périphériques, où le CD23 est exprimé sur les lymphocytes B et certaines cellules myéloïdes.
• Incluez des contrôles isotypiques appropriés et des étapes de blocage des récepteurs Fc pour minimiser la liaison non spécifique, en particulier dans les échantillons avec une forte expression de FcγR.
• Étant donné que le poids moléculaire prédit est d'environ 37 kDa (non glycosylé) mais que la glycoprotéine mature migre à environ 45–50 kDa sur SDS-PAGE, cet anticorps peut ne pas être adapté au western blot à moins que les conditions réductrices/dénaturantes ne soient soigneusement optimisées. Son application rapportée est spécifiquement la cytométrie en flux.
• Validez la coloration dans votre lignée de souris spécifique et le sous-ensemble cellulaire d'intérêt, car les niveaux d'expression du CD23 peuvent varier selon l'état d'activation et le microenvironnement.

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