Anticorps monoclonal de lapin anti-Ki67 humain/singe pour la cytométrie en flux intracellulaire - P46013

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de Ki67

• La protéine marqueur de prolifération Ki-67 (antigène KI-67, MKI67) est une grande protéine nucléaire (358,7 kDa) qui s'associe à la surface des chromosomes mitotiques et joue un double rôle : répulsif des chromosomes au début de la mitose et attracteur au cours de la mitose tardive.
• Au début de la mitose, Ki-67 forme des structures en brosse étendues sur les chromosomes, empêchant leur effondrement en une seule masse de chromatine grâce à des barrières stériques et électrostatiques, permettant ainsi la motilité indépendante des chromosomes. Références associées : PMID:27362226
• Au cours de l'anaphase mitotique, la déphosphorylation de Ki-67 et l'exposition d'une région basique conservée induisent une séparation de phase liquide-liquide dépendante de l'ARN à la surface des chromosomes, transformant Ki-67 en attracteur chromosomique afin de favoriser le regroupement et l'exclusion des particules cytoplasmiques de l'espace nucléaire futur. Références associées : PMID:32879492, PMID:39153474
• Ki-67 se lie à l'ADN, avec une préférence pour l'ADN surenroulé et riche en AT, et se lie également aux ARN ribosomiques prématurés pendant l'anaphase, contribuant ainsi à la séparation de phase. Références associées : PMID:10878551, PMID:28935370
• La protéine se localise sur les chromosomes, dans le noyau et, de manière prédominante, dans le nucléole pendant l'interphase.
• Elle subit de multiples modifications post-traductionnelles, notamment la phosphorylation, l'acétylation et la formation de liaisons isopeptidiques, et est soumise à l'épissage alternatif et à l'ubiquitination (mots-clés : acétylation, épissage alternatif, phosphoprotéine, conjugaison Ubl).
• L'épissage alternatif génère plusieurs isoformes de MKI67, contribuant à la diversité fonctionnelle.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L'immunogène est un peptide synthétique couvrant les résidus 2271–2370 du Ki67 humain, garantissant la spécificité de l'épitope pour la détection intracellulaire.
• Pour la cytométrie en flux intracellulaire, optimisez soigneusement les conditions de fixation et de perméabilisation afin de permettre l'accès de l'anticorps au Ki-67 nucléaire tout en préservant l'intégrité de l'épitope.
• Envisagez de titrer le conjugué afin de déterminer la concentration optimale pour votre type cellulaire et votre protocole de marquage.
• Validez l'anticorps sur des cellules humaines et de singe en prolifération, en utilisant des contrôles d'isotype appropriés ainsi que des cellules non stimulées ou arrêtées en phase G0 comme contrôles négatifs.
• Évitez une exposition prolongée à la lumière afin de protéger le fluorophore ; suivez les pratiques standard de stockage et de manipulation des anticorps conjugués.

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