Anticorps monoclonal de lapin anti-Ki67 humain/singe pour cytométrie en flux - P46013

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation du Ki67

• Le Ki67 est une protéine nucléaire largement utilisée comme marqueur de prolifération, avec deux isoformes d’environ 319 kDa et 359 kDa résultant d’un épissage alternatif.
• Au début de la mitose, le Ki67 se relocalise des nucléoles vers la surface des chromosomes, formant une structure en forme de brosse qui empêche l’agrégation des chromosomes par répulsion stérique et électrostatique, assurant ainsi la mobilité indépendante des chromosomes. Références associées : PMID:27362226
• À l’anaphase, la déphosphorylation déclenche un changement fonctionnel : le Ki67 se condense en une phase condensée qui attire les chromosomes les uns vers les autres, facilitant la reformation de l’enveloppe nucléaire et l’exclusion des particules cytoplasmiques. Références associées : PMID:32879492 PMID:39153474
• Le Ki67 se lie aux ARN ribosomiques prématurés pendant l’anaphase, favorisant une séparation de phase liquide-liquide à la surface des chromosomes, ce qui est essentiel au regroupement des chromosomes. Références associées : PMID:28935370 PMID:39153474
• La protéine se lie également à l’ADN, avec une préférence pour les séquences surenroulées et riches en AT, bien que son rôle direct dans l’organisation de la chromatine demeure incertain. Références associées : PMID:10878551
• Localisation subcellulaire : le Ki67 se trouve principalement dans le nucléole pendant l’interphase, s’associe aux chromosomes en condensation pendant la mitose et recouvre toute la surface des chromosomes.
• Les modifications post-traductionnelles comprennent la phosphorylation, l’acétylation et l’ubiquitination, qui régulent ses fonctions mitotiques et sa stabilité.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L’immunogène est un peptide synthétique correspondant aux acides aminés 2271 à 2370 du Ki67 humain, situé dans la région C-terminale. Veillez à ce que l’épitope cible soit accessible dans les conditions de fixation et de perméabilisation prévues.
• Pour la cytométrie en flux intracellulaire (FC intra), utilisez des tampons de perméabilisation compatibles avec les antigènes nucléaires. Incluez des contrôles d’isotype appropriés et validez le marquage sur une lignée cellulaire connue pour être proliférative (par ex. HeLa, Jurkat) par comparaison avec un contrôle non prolifératif.
• Une réactivité croisée avec le singe cynomolgus est rapportée ; vérifiez-la dans votre système expérimental spécifique si vous travaillez avec d’autres espèces.
• Le fluorophore conjugué constitue un substitut au Pacific Blue/eFluor 450 ; assurez-vous de la compatibilité avec l’instrument et évitez toute exposition prolongée à la lumière.

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