Anticorps monoclonal lapin anti-CD8a humain/singe pour cytométrie en flux - P01732

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de CD8a

• CD8A est la chaîne alpha glycoprotéique de surface du lymphocyte T, également appelée T8/Leu-2, codée par le gène CD8A chez l'homme. L'épissage alternatif génère de multiples isoformes.
• Sa fonction principale est celle de corécepteur glycoprotéique membranaire intégral pour les molécules du CMH de classe I. Dans les lymphocytes T, il interagit simultanément avec le récepteur des lymphocytes T (TCR) et le complexe peptide-CMH de classe I, recrutant la kinase Src LCK sur le complexe TCR-CD3 pour initier des voies de signalisation intracellulaires conduisant à l'activation des lymphocytes T cytotoxiques (CTL), à la production de lymphokines et à l'adhésion.
• Les homodimères CD8A sur les cellules tueuses naturelles (NK) constituent un mécanisme de survie, permettant la conjugaison et la lyse de plusieurs cellules cibles, et favorisent la différenciation des lymphocytes activés en lymphocytes T CD8 mémoires.
• CD8A appartient à la superfamille des immunoglobulines et forme typiquement des hétérodimères liés par des ponts disulfures avec CD8B (chaîne bêta de CD8) sur les lymphocytes T d'origine thymique ; des homodimères sont également exprimés sur des sous-populations de cellules immunitaires.
• La localisation subcellulaire inclut la membrane cellulaire et une forme sécrétée. C'est une protéine membranaire de type I à passage unique, avec un peptide signal, un domaine extracellulaire de type immunoglobuline, une hélice transmembranaire et une queue cytoplasmique.
• Spécificité tissulaire : Exprimé sur les lymphocytes T cytotoxiques, une sous-population de cellules NK, les lymphocytes T mémoires, les lymphocytes intraépithéliaux, les monocytes, les cellules dendritiques, et sur les cellules dendritiques plasmacytoïdes après stimulation par le virus de l'herpès simplex de type 1.
• Modifications post-traductionnelles et mots-clés : Glycosylé, palmitoylé, et contient des ponts disulfures. Répertorié comme glycoprotéine, lipoprotéine, pont disulfure ; impliqué dans l'immunité adaptative, l'épissage alternatif ; associé à des variants pathogènes.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène est une protéine recombinante couvrant la région extracellulaire (acides aminés 22-182). Cette conception permet généralement d'obtenir des anticorps reconnaissant des épitopes de surface sur cellules vivantes sans perméabilisation, ce qui le rend parfaitement adapté à la coloration directe en cytométrie en flux (FC).
• Pour la FC, titrez le conjugué pour déterminer la dilution de travail optimale. Incluez des anticorps contrôle isotype appropriés et un blocage des récepteurs Fc. Vérifiez la spécificité à l'aide de lignées cellulaires connues pour être positives pour CD8A (par exemple Jurkat) ou de cellules mononucléées de sang périphérique.
• Une réactivité croisée avec le singe cynomolgus est rapportée. Si vous utilisez des échantillons de cynomolgus, validez l'anticorps dans votre propre système d'essai avec des contrôles adaptés.
• Plusieurs poids de protéine (21, 25 et 30 kDa) sont indiqués ; ceux-ci correspondent probablement à des formes glycosylées différentes ou à des variants d'isoforme. Si vous réalisez un western blot comme étape de confirmation, attendez la présence potentielle de plusieurs bandes.
• Pour les panels de cytométrie en flux multicolore, confirmez le chevauchement spectral minimal avec les autres fluorophores et incluez des contrôles de compensation. La nature monoclonale de lapin et la conjugaison directe facilitent l'obtention de résultats reproductibles.

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