Anticorps monoclonal de lapin anti-humain/singe CD14 pour cytométrie en flux - P08571

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de CD14

• CD14 est une glycoprotéine riche en leucine spécifique des cellules myéloïdes, également connue sous le nom d'antigène de différenciation monocytaire CD14 ou antigène My23.
• CD14 agit comme un corécepteur clé du lipopolysaccharide bactérien (LPS), médiant la reconnaissance immunitaire innée et la réponse. Références associées : PMID:1698311, PMID:23264655
• En collaboration avec la LBP, CD14 lie le LPS monomère et le délivre au complexe LY96/TLR4, activant ainsi la voie NF-kappa-B et la sécrétion de cytokines pro-inflammatoires via des voies dépendantes de MyD88, TIRAP et TRAF6. Références associées : PMID:20133493, PMID:22265692, PMID:23264655, PMID:8612135
• De plus, CD14 agit comme corécepteur pour les hétérodimères TLR2:TLR6 et TLR2:TLR1, reconnaissant respectivement les lipopeptides diacylés et triacylés, et déclenchant une signalisation dépendante des radeaux lipidiques. Références associées : PMID:16880211
• CD14 lie également le LDL électronégatif (LDL(-)) et médie la libération de cytokines induite par le LDL(-), l'impliquant dans l'inflammation associée à l'athérosclérose. Références associées : PMID:23880187
• Au niveau protéique, CD14 est fortement détecté à la surface des monocytes et faiblement sur les granulocytes ; il est également exprimé par la plupart des macrophages tissulaires. Références associées : PMID:1698311
• Au niveau sous-cellulaire, CD14 est localisé sur la membrane cellulaire, enrichi dans les radeaux membranaires, et se trouve également dans l'appareil de Golgi ; une forme soluble secrétée existe également.
• La protéine est une glycoprotéine ancrée par un GPI avec de multiples répétitions riches en leucine et des ponts disulfures, des caractéristiques essentielles à sa fonction.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Pour la coloration en cytométrie en flux, titrez l'anticorps conjugué à l'en utilisant des cellules mononucléées du sang périphérique humain (PBMC) ou des leucocytes de singe cynomolgus pour déterminer la dilution optimale.
• Étant donné que CD14 est une protéine membranaire ancrée par un GPI, utilisez un protocole de coloration de surface cellulaire ; évitez la perméabilisation à moins qu'une coloration intracellulaire ne soit prévue, car cela pourrait perturber les complexes localisés dans les radeaux.
• Envisagez une co-coloration avec des marqueurs de monocytes/macrophages (par ex. CD16, CD163) et des colorants de viabilité pour trier précisément les populations de monocytes.
• Vérifiez la réactivité croisée sur des échantillons de cynomolgus si vous poursuivez des études sur des primates non humains ; la réactivité rapportée de l'anticorps avec le cynomolgus permet la recherche translationnelle.
• Comme CD14 peut être libéré sous forme soluble, évitez les étapes de lavage excessives qui pourraient éliminer l'anticorps faiblement lié ; utilisez un tampon 0,5 % BSA/PBS pour la coloration.
• Pour l'analyse des données, utilisez des contrôles de compensation appropriés lors de l'utilisation de l', et triez par FSC/SSC pour identifier les populations de monocytes/macrophages.

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