Anticorps monoclonal de lapin anti-TNF-α humain pour cytométrie en flux intracellulaire - P01375

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du facteur de nécrose tumorale

• Le facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-α), également connu sous le nom de cachectine ou TNFSF2, est une cytokine clé de la superfamille du TNF et existe sous forme transmembranaire et soluble. La forme soluble dérive du clivage protéolytique du précurseur lié à la membrane.
• Le TNF-α se lie à ses récepteurs TNFRSF1A/TNFR1 et TNFRSF1B/TNFBR, déclenchant des voies de signalisation qui conduisent à l'apoptose, à la survie cellulaire, à l'inflammation et à la modulation immunitaire. C'est un puissant pyrogène, provoquant de la fièvre directement ou par induction de l'IL-1, et il est impliqué dans l'induction de la cachexie.
• Dans la polyarthrite rhumatoïde, le TNF-α altère la fonction des cellules T régulatrices en régulant à la hausse la phosphatase 1 des protéines (PP1), qui déphosphoryle FOXP3 sur la Ser-418, désactivant ainsi FOXP3 et rendant les cellules Treg fonctionnellement défectueuses. Références connexes : PMID:23396208
• Le TNF-α agit comme médiateur de la mort cellulaire dans les réponses immunitaires anticancéreuses, comme illustré par son rôle avec les neutrophiles stimulés par le BCG et les mimétiques DIABLO/SMAC dans les cellules du cancer de la vessie. Références connexes : PMID:16829952, PMID:22517918, PMID:23396208
• Il favorise l'angiogenèse en induisant synergiquement la production de VEGF avec l'IL1B et l'IL6. Références connexes : PMID:12794819
• Le TNF-α induit une résistance à l'insuline dans les adipocytes en inhibant la phosphorylation de la tyrosine IRS1 induite par l'insuline et l'absorption de glucose, en partie par dégradation de la protéine GKAP42, et favorise l'ostéoclastogenèse, contribuant à la résorption osseuse.
• À l'échelle subcellulaire, le TNF-α est situé à la membrane cellulaire, dans les membranes intracellulaires et est sécrété. La forme du domaine intracellulaire du TNF (ICD) peut en outre induire la production d'IL12 dans les cellules dendritiques.
• Les modifications post-traductionnelles comprennent la formation de ponts disulfures, la glycosylation, la myristoylation et la phosphorylation, qui sont critiques pour sa stabilité et son activité.

Conseils expérimentaux et techniques

• L'immunogène (acides aminés 77-233) correspond à la forme soluble mature du TNF-α, dépourvue du domaine transmembranaire N-terminal. Cette conception peut favoriser la détection des formes sécrétées et des précurseurs intracellulaires.
• Le conjugué est optimisé pour la cytométrie en flux ; pour le marquage intracellulaire, envisagez d'utiliser un protocole de fixation/perméabilisation validé pour les cytokines. Incluez des témoins d'isotype appropriés et confirmez le marquage sur des échantillons stimulés par rapport à des échantillons non stimulés.
• Effectuez des expériences de titration pour déterminer la concentration optimale d'anticorps pour votre configuration expérimentale spécifique, car les indices de marquage peuvent varier selon les types cellulaires et les états d'activation.

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