Anticorps monoclonal lapin anti-TNF-α humain pour cytométrie en flux (intracellulaire) - P01375

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du TNF-α

• Le facteur de nécrose tumorale (TNF-α), également appelé cachectine et TNFSF2, est une cytokine de 26 kDa codée par le gène TNF situé sur le chromosome 6p21.3.

• Principalement sécrété par les macrophages, le TNF-α agit comme un pyrogène endogène puissant, induisant la fièvre directement et via l'IL-1, et c'est un médiateur clé de la cachexie dans l'inflammation chronique et le cancer.

• Il se lie à TNFRSF1A/TNFR1 et TNFRSF1B/TNFBR, déclenchant des cascades de signalisation qui régulent la survie cellulaire, l'apoptose et la différenciation dans un large éventail de types cellulaires.

• La cytokine est synthétisée sous forme de protéine transmembranaire de type II ; son ectodomaine soluble est clivé par TACE/ADAM17, ce qui permet à la fois des activités juxtacrines locales et systémiques de type endocriniennes.

• Les modifications post-traductionnelles incluent la glycosylation, la formation de ponts disulfures, la myristoylation et la phosphorylation, qui sont essentielles pour le repliement correct, le trafic et la liaison au récepteur.

• Dans l'arthrite rhumatoïde, le TNF-α favorise l'inflammation auto-immune en altérant la fonction des lymphocytes T régulateurs (Treg) via la déphosphorylation médiée par PP1 et l'inactivation du facteur de transcription FOXP3 (PubMed:23396208).

  Références associées : PMID:23396208

• Le TNF-α contribue à l'immunité anticancéreuse en médiant la cytotoxicité dépendante des neutrophiles contre les cellules du cancer de la vessie en combinaison avec des médicaments mimétiques du SMAC (PubMed:16829952, PubMed:22517918).

  Références associées : PMID:16829952, PMID:22517918

• Il induit synergiquement la production de VEGF avec l'IL-1β et l'IL-6 pour favoriser l'angiogenèse (PubMed:12794819) et stimule l'ostéoclastogenèse, entraînant la destruction osseuse dans les maladies inflammatoires (Par similarité).

  Références associées : PMID:12794819

Conseils expérimentaux et techniques

• L'immunogène couvrant le domaine extracellulaire (acides aminés 77-233), l'anticorps est susceptible de reconnaître à la fois les formes membranaire et soluble du TNF-α.
• Pour la cytométrie en flux intracellulaire, respectez des protocoles de perméabilisation et de fixation adaptés pour permettre l'accès au TNF-α cytoplasmique ; envisagez d'utiliser un contrôle positif connu tel que des monocytes activés.
• Validez l'anticorps dans le système d'échantillon concerné ; du sang total humain ou des PBMC stimulés par du LPS peuvent être utilisés pour induire l'expression du TNF-α pour la coloration intracellulaire.
• Le TNF-α étant sécrété, l'utilisation d'un inhibiteur du transport protéique (par exemple la bréfeldine A ou la monensine) est recommandée pendant la stimulation cellulaire pour accumuler la protéine intracellulaire.
• Prenez soin d'éviter la liaison non spécifique en titrant l'anticorps et en utilisant des contrôles d'isotype adaptés.

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