Anticorps monoclonal de lapin anti-Siglec-8 humain pour cytométrie en flux - Q9NYZ4

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de Siglec-8

• Siglec-8 est une lectine de type Ig se liant à l'acide sialique, également connue sous le nom de membre 2 de la famille des sialoadhésines (SAF-2). Il est codé par le gène SIGLEC8 et appartient à la sous-famille des Siglecs liés à CD33.
• Il fonctionne comme une molécule d'adhésion putatif qui médie la liaison dépendante de l'acide sialique aux cellules sanguines, reconnaissant préférentiellement l'acide sialique lié en α2,3 et se liant également à l'acide sialique lié en α2,6. Références associées : PMID:10625619 PMID:10856141
• Il reconnaît les épitopes nécessitant un acide N-acétylneuraminique (acide sialique) terminal et un galactose 6-O-sulfaté sous-jacent, avec une préférence pour les glycanes sialyl-Lewis X sulfatés en position 6 du galactose. Références associées : PMID:27357658
• Le site de reconnaissance de l'acide sialique peut être masqué par des interactions cis avec les acides sialiques sur la surface de la même cellule, modulant son activité de liaison.
• Il est exprimé spécifiquement à la surface des éosinophiles, des basophiles et des mastocytes, ce qui indique son rôle dans les réponses allergiques et inflammatoires.
• Il est localisé subcellulairement à la membrane, ce qui est cohérent avec sa fonction de récepteur transmembranaire.
• Il contient un peptide signal N-terminal, des domaines extracellulaires de type Ig (type V et type C2), une hélice transmembranaire et une queue cytoplasmique ; il est classé comme glycoprotéine avec des liaisons disulfure.
• Plusieurs isoformes protéiques existent du fait de l'épissage alternatif, avec des poids moléculaires rapportés de 44 kDa, 46 kDa et 54 kDa.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène est une protéine recombinante couvrant les acides aminés 17 à 363, qui couvre la région extracellulaire, garantissant probablement la reconnaissance du Siglec-8 natif exprimé à la surface.
• Cet anticorps est validé pour la cytométrie en flux (FC) ; envisagez une titration entre 0,1 et 1 μg par test pour déterminer la concentration de coloration optimale pour votre population cellulaire.
• Pour la coloration de sang total humain ou de PBMC, incluez une étape de blocage des récepteurs Fc et des contrôles d'isotype appropriés pour minimiser la liaison non spécifique.
• Vérifiez la spécificité en comparant la coloration sur des cellules primaires positives pour Siglec-8 (éosinophiles, basophiles) par rapport à des lymphocytes négatifs pour Siglec-8.
• En raison du masquage cis potentiel de l'épitope, vérifiez que le traitement des cellules à la sialidase ne modifie pas la liaison de l'anticorps si nécessaire pour votre essai.
• Utilisez une porte de sélection des cellules viables et, si vous effectuez une fixation, assurez-vous que les conditions de fixation / perméabilisation ne déforment pas l'épitope reconnu par l'anticorps.

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