Anticorps monoclonal lapin anti-Siglec-8 humain pour FC - Q9NYZ4

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la Siglec-8

• Siglec-8 (sialic acid-binding Ig-like lectin 8, lectine 8 de type immunoglobuline se liant à l'acide sialique), également désignée membre 2 de la famille des sialoadhésines (SAF-2), est un membre de la famille des sialoadhésines des lectines.
• C'est une molécule d'adhésion putative qui médie la liaison dépendante de l'acide sialique aux cellules sanguines. Références associées : PMID:10625619 PMID:10856141
• Siglec-8 se lie préférentiellement à l'acide sialique lié en α-2,3 et, dans une moindre mesure, à l'acide sialique lié en α-2,6 ; les interactions cis sur la même surface cellulaire peuvent masquer le site de liaison. Références associées : PMID:10625619
• Elle reconnaît l'acide N-acétylneuraminique terminal (acide sialique) associé à un galactose 6-O-sulfaté, présentant une préférence pour les épitopes glycanes du sialyl-Lewis X sulfaté en position 6 du galactose. Références associées : PMID:27357658
• La protéine est une glycoprotéine membranaire de type I à passage unique, contenant des domaines de type immunoglobuline, un peptide signal et une hélice transmembranaire ; elle possède des ponts disulfures et des sites de glycosylation potentiels.
• L'expression est fortement restreinte aux cellules sanguines, principalement les basophiles, les mastocytes et les éosinophiles.
• L'épissage alternatif génère des isoformes de poids moléculaires prédits de 44 kDa, 46 kDa et 54 kDa.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène (dom extracellulaire, aa 17–363) indique que l'anticorps reconnaît la région proximale de la membrane de la Siglec-8 humaine ; pensez à vérifier la coloration de surface cellulaire par rapport à la coloration intracellulaire dans votre expérience.
• Puisqu'il s'agit d'un anticorps directement conjugué, aucune étape de coloration secondaire n'est requise ; assurez-vous de limiter l'exposition à la lumière et fixez les cellules si nécessaire pour la cytométrie en flux.
• Réalisez un titrage de l'anticorps pour déterminer la concentration optimale pour votre type d'échantillon spécifique ; les dilutions initiales typiques varient de 1:50 à 1:200, mais cela doit être validé expérimentalement.
• Utilisez un contrôle d'isotype approprié conjugué au même fluorophore pour évaluer la liaison non spécifique de fond.
• L'expression de Siglec-8 est restreinte aux basophiles, mastocytes et éosinophiles — réalisez une co-coloration avec des marqueurs de lignée (par ex. CD45, CD3, CD19, CD16, CD123, HLA-DR) pour confirmer les populations cellulaires.
• Pour la coloration sur sang total, envisagez une lyse des globules rouges ou une séparation par gradient de densité pour enrichir les leucocytes, et validez les stratégies de gate avec des contrôles positifs et négatifs connus.

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