Anticorps monoclonal de lapin anti-Humain Phospho-PI3KP85α-Y467+P85β-Y464+P55γ-Y199 - P27986 / O00459 / Q92569

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation des sous-unités régulatrices de la PI3K (p85α/p85β/p55γ)

• PIK3R1 code pour la sous-unité régulatrice p85α de la PI3K, qui existe sous plusieurs isoformes (p85α, p55α, p50α) par épissage alternatif. L'isoforme p85α est la protéine pleine longueur, tandis que les isoformes plus courtes manquent du domaine SH3 N-terminal et de la région d'homologie BH. Cet anticorps reconnaît les formes phosphorylées des trois produits géniques PIK3R1 (p85α), PIK3R2 (p85β) et PIK3R3 (p55γ).
• Les sous-unités régulatrices se lient aux protéines-tyrosine kinases activées (phosphorylées) via leurs domaines SH2, fonctionnant comme des molécules adaptatrices qui recrutent la sous-unité catalytique p110 à la membrane plasmique, activant ainsi la signalisation PI3K. Références associées : PMID:17626883 PMID:19805105 PMID:7518429
• Les sous-unités régulatrices de la PI3K sont essentielles pour la capture du glucose stimulée par l'insuline et la synthèse du glycogène dans les tissus sensibles à l'insuline comme le muscle squelettique et le foie. Elles médient également la signalisation en aval des récepteurs aux facteurs de croissance (FGFR1-4, PDGFR, KIT) et de l'intégrine ITGB2. Références associées : PMID:17626883 PMID:7518429
• p85α module la réponse cellulaire au stress du réticulum endoplasmique (RE) en favorisant la translocation nucléaire de l'isoforme 2 de XBP1 de manière dépendante du stress du RE et/ou de l'insuline, en particulier lors d'une surcharge métabolique dans le foie, améliorant ainsi la tolérance au glucose. Références associées : PMID:20348923
• Les sous-unités p85α/p85β/p55γ sont principalement cytoplasmiques, où elles s'associent à la sous-unité catalytique p110. Lors de l'activation, elles sont recrutées à la membrane plasmique pour localiser l'holoenzyme PI3K près de ses substrats lipidiques.
• Les modifications post-traductionnelles incluent la phosphorylation sur plusieurs résidus tyrosine (par ex., Y467 de p85α, Y464 de p85β, Y199 de p55γ) par des tyrosine kinases réceptrices et non réceptrices, ce qui est critique pour réguler l'activité de la PI3K et les interactions protéine-protéine. Des modifications supplémentaires incluent l'acétylation et l'ubiquitination.
• L'isoforme 2 de PIK3R1 (p55α) est fortement exprimée dans le muscle squelettique et le cerveau, avec des niveaux plus faibles dans le rein et le muscle cardiaque. Au niveau protéique, l'isoforme 2 et l'isoforme 4 (p50α) sont détectées dans le muscle squelettique, suggérant des rôles spécifiques aux tissus dans la signalisation de l'insuline et le métabolisme.
• Les mutations de PIK3R1 sont associées au syndrome SHORT (petite taille, hyperextensibilité, dépression oculaire, anomalie de Rieger et retard dentaire) et à d'autres troubles de la croissance, soulignant son rôle dans le développement et la signalisation du facteur de croissance analogue à l'insuline.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène est un phosphopeptide synthétique englobant Y467 de la p85α humaine. Assurez-vous que votre système expérimental préserve la phosphorylation — utilisez des inhibiteurs de phosphatases pendant la préparation des échantillons et envisagez des conditions de stimulation (par ex., insuline, facteurs de croissance) pour améliorer la détection de l'épitope phospho.
• Cet anticorps est validé pour la cytométrie en flux intracellulaire (FC). Pour une coloration optimale, fixez et perméabilisez les cellules en utilisant des protocoles compatibles avec la détection phospho-spécifique (par ex., fixation au formaldéhyde suivie d'une perméabilisation au méthanol). Titrez l'anticorps pour déterminer la dilution optimale pour votre type cellulaire et vos conditions de traitement.
• Étant donné que l'anticorps reconnaît le phospho-Y467 de p85α, le phospho-Y464 de p85β et le phospho-Y199 de p55γ, la gamme de poids moléculaires observée peut varier. En transfert Western (si tenté), des bandes peuvent apparaître entre 42-54 kDa (pour les isoformes courtes) et 81-84 kDa (pour la p85α/p85β pleine longueur). Utilisez des contrôles positifs appropriés (par ex., cellules HepG2 ou HeLa stimulées par l'insuline) et vérifiez la spécificité en utilisant un traitement à la phosphatase.
• Envisagez d'utiliser cet anticorps en combinaison avec des anticorps dirigés contre la sous-unité régulatrice totale de la PI3K pour évaluer les rapports de phosphorylation dans les études de signalisation. Pour la FC quantitative, assurez-vous que le fluorophore est compatible avec la configuration de votre cytomètre et que des contrôles de compensation sont inclus en cas de multiplexage.
• La réactivité croisée est rapportée pour l'humain. Si vous travaillez avec d'autres espèces, validez la conservation des sites phospho cibles par alignement de séquences avant utilisation.

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