Anticorps monoclonal lapin anti-Humain Phospho-PI3K p85α (Y467)/p85β (Y464)/p55γ (Y199) pour cytométrie en flux (intracellulaire) - P27986 / O00459 / Q92569

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation des sous-unités régulatrices de PI3K (p85α/p85β/p55γ)

• La sous-unité régulatrice alpha de la phosphatidylinositol 3-kinase (PIK3R1) code pour la sous-unité régulatrice p85α, qui existe sous plusieurs isoformes par épissage alternatif, y compris l'isoforme 2 exprimée dans le muscle squelettique et le cerveau, et à des niveaux plus faibles dans le rein et le muscle cardiaque.
• Contient un domaine SH3 et deux domaines SH2 qui médient la liaison aux résidus de tyrosine phosphorylés sur les récepteurs tyrosine kinases activés et les protéines adaptatrices, reliant les sous-unités catalytiques p110 à la membrane plasmique.
• Agit comme un adaptateur critique dans la signalisation PI3K/AKT, nécessaire pour la capture de glucose stimulée par l'insuline et la synthèse du glycogène ; agit également en aval de FGFR, KIT, PDGFRA/B et ITGB2. Références connexes : PMID:17626883, PMID:19805105, PMID:7518429
• Module la réponse au stress du réticulum endoplasmique en favorisant la translocation nucléaire de l'isoforme 2 de XBP1, améliorant la tolérance hépatique au glucose en cas de surcharge métabolique. Références connexes : PMID:20348923
• Les sous-unités régulatrices p85β (PIK3R2) et p55γ (PIK3R3) partagent une homologie structurale avec p85α et contiennent des sites de phosphorylation analogues, bien que leur distribution tissulaire et leurs fonctions spécifiques puissent varier.
• Les mots-clés d'UniProt incluent Phosphoprotéine, domaine SH2, domaine SH3, épissage alternatif, Cytoplasme et conjugaison Ubl ; la protéine est sujette à l'acétylation et à l'ubiquitination.
• La localisation subcellulaire est principalement cytoplasmique, où elle interagit avec les récepteurs liés à la membrane.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène est un phosphopeptide synthétique correspondant à Y467 de la p85α de PI3K humaine ; la réactivité croisée avec les sites phosphorylés homologues dans la p85β (Y464) et la p55γ (Y199) est intentionnelle sur la base de la conservation de la séquence, mais l'alignement des séquences doit être vérifié pour tenir compte des effets hors cible.
• Pour la cytométrie en flux intracellulaire, optimisez les protocoles de perméabilisation et de fixation pour préserver les épitopes phosphorylés ; utilisez des contrôles phospho-spécifiques appropriés et des conditions de stimulation (par exemple, privation de sérum suivie d'un traitement par des facteurs de croissance) pour confirmer la spécificité du signal.
• Comme l'anticorps est directement conjugué à l', aucun anticorps secondaire n'est nécessaire, ce qui réduit le bruit de fond ; incluez des contrôles de compensation appropriés lors du multiplexage avec d'autres fluorochromes.
• Envisagez de valider dans des lignées cellulaires humaines pertinentes connues pour exprimer les sous-unités PI3K et phosphoryler ces sites lors de l'activation des récepteurs de l'insuline ou des facteurs de croissance.

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