Anticorps monoclonal de lapin anti-LAMP2 humain pour IF/ICC et cytométrie en flux intracellulaire - P13473

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de LAMP2

• LAMP2 (glycoprotéine membranaire lysosomale 2), également connue sous les noms CD107b, LAMP-2, LGP-96 ou LGP110, est une protéine transmembranaire fortement glycosylée codée par le gène LAMP2. Par épissage alternatif, elle produit trois isoformes principales : LAMP-2A, LAMP-2B et LAMP-2C, qui diffèrent par leurs queues cytosoliques et présentent des distributions tissulaires distinctes.
• En tant que glycoprotéine clé de la membrane lysosomale, LAMP2 joue un rôle essentiel dans la biogenèse des lysosomes et la régulation du pH en agissant comme un inhibiteur direct du canal à protons TMEM175, favorisant ainsi l'acidification lysosomale et une activité optimale des hydrolases. Références associées : PMID:37390818
• LAMP2 est un médiateur central de l'autophagie médiée par les chaperons (CMA), une voie de dégradation sélective. Elle se lie aux complexes de chaperons cytosoliques (par ex. HSPA8/HSC70) qui acheminent des protéines cibles telles que GAPDH, GPX4, NLRP3 et MLLT11 vers la membrane lysosomale, où LAMP2 agit comme un récepteur pour transloquer les substrats dans le lysosome en vue de leur dégradation. Références associées : PMID:11082038, PMID:18644871, PMID:24880125, PMID:36586411
• LAMP2 est nécessaire à la fusion des autophagosomes avec les lysosomes lors de la macroautophagie ; les cellules dépourvues de LAMP2 n'accumulent pas STX17 sur les autophagosomes, ce qui empêche la fusion et altère la dégradation du contenu autophagique. Références associées : PMID:27628032
• LAMP2 facilite la présentation efficace d'antigènes exogènes médiée par le CMH de classe II en permettant la dégradation lysosomale, puis le chargement des peptides antigéniques sur les molécules naissantes du CMH II, bien qu'elle soit dispensable pour la présentation des antigènes endogènes. Références associées : PMID:15894275, PMID:20518820
• Au niveau subcellulaire, LAMP2 se localise principalement sur la membrane lysosomale, mais elle est également présente dans les membranes endosomales, autophagosomales et plasmatiques, ce qui reflète son trafic dynamique et ses fonctions dans les voies endolysosomale et autophagique.
• Des profils d'expression spécifiques aux isoformes sont observés : LAMP-2A est fortement exprimée dans le placenta, les poumons et le foie, tandis que LAMP-2B et LAMP-2C présentent des distributions distinctes dans des tissus tels que la rate, le thymus, le cerveau et l'intestin grêle. Références associées : PMID:26856698, PMID:7488019
• Il est à noter que LAMP2 est associée à la maladie de Danon, une maladie du stockage du glycogène, et que son étude fait intervenir des mots-clés tels que l'épissage alternatif, l'autophagie, le pont disulfure, la glycoprotéine et l'hélice transmembranaire.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L'immunogène correspond aux acides aminés 29 à 375 de LAMP2 humaine, couvrant un vaste domaine luminal commun à toutes les isoformes ; cette large couverture permet de détecter plusieurs variants de LAMP2 lorsque l'homologie de séquence le permet.
• L'anticorps est directement conjugué à , ce qui permet une coloration en une seule étape pour l'immunofluorescence (IF/ICC) et la cytométrie en flux intracellulaire (FC intra), sans nécessiter d'anticorps secondaires.
• Pour la cytométrie en flux intracellulaire, une fixation et une perméabilisation sont nécessaires ; utilisez des protocoles standard (par ex. fixation au PFA à 4 %, suivie d'une perméabilisation à la saponine ou au Triton X-100) et optimisez les temps d'incubation ainsi que les concentrations d'anticorps pour votre type cellulaire spécifique.
• Validez les performances de l'anticorps dans le système biologique pertinent (humain) et incluez des contrôles positifs et négatifs appropriés (par ex. des cellules de type sauvage comparées à des cellules avec extinction de LAMP2) afin de confirmer sa spécificité.
• Comme LAMP2 est fortement glycosylée et existe sous plusieurs isoformes, le poids moléculaire apparent en Western blot peut différer des 44 à 45 kDa prévus ; les tests par WB ne sont pas répertoriés. Si nécessaire, envisagez des expériences préliminaires pour vérifier la capacité de détection.

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