Anticorps monoclonal de lapin anti-humain IL-6R/CD126 pour cytométrie en flux (intracellulaire) - P08887

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de l'IL-6R/CD126

• La sous-unité alpha du récepteur de l'interleukine-6 (IL-6R, CD126/gp80) est une glycoprotéine transmembranaire qui existe sous une forme liée à la membrane et sous une isoforme soluble (sIL6R), générée par épissage alternatif et clivage protéolytique.
  Références associées : PMID:28060820

• L'IL-6R lié à la membrane se lie à l'interleukine-6 (IL-6) avec une faible affinité ; la transduction du signal nécessite son association avec le co-récepteur gp130 afin d'activer les voies JAK/STAT, MAPK et d'autres voies, régulant les réponses immunitaires, les réactions de phase aiguë et l'hématopoïèse. La signalisation classique via l'IL-6R membranaire est principalement régénérative et anti-inflammatoire, son expression étant essentiellement limitée aux hépatocytes et à certains sous-ensembles de leucocytes.
  Références associées : PMID:28265003, PMID:30995492, PMID:31235509

• L'IL-6R soluble (sIL6R) agit comme un agoniste en formant un complexe IL-6:sIL6R qui se lie à gp130 sur les cellules dépourvues d'IL-6R membranaire, permettant la trans-signalisation de l'IL-6. La trans-signalisation est pro-inflammatoire, contribue aux maladies inflammatoires chroniques, induit la production de VEGF et régule l'homéostasie énergétique et glucidique dans le système nerveux central.
  Références associées : PMID:21990364, PMID:12794819

• Dans la signalisation en cluster, les complexes IL-6:IL-6R liés à la membrane d'une cellule activent gp130 sur les cellules adjacentes ; ce mode de signalisation est utilisé par les cellules dendritiques pour favoriser la différenciation Th17 des cellules T CD4⁺ naïves.

• L'IL-6R est exprimé sur les cellules mononucléées du sang périphérique et les hépatocytes ; l'sIL6R est détectable à de faibles concentrations dans le sérum et l'urine. Environ 1 à 20 % de l'sIL6R plasmatique provient de l'épissage alternatif.
  Références associées : PMID:28060820

• La région extracellulaire contient des domaines de type immunoglobuline et un module d'homologie des récepteurs de cytokines, stabilisés par des ponts disulfure. La protéine subit une N-glycosylation, importante pour la liaison au ligand et la stabilité du récepteur.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L'immunogène couvre le domaine extracellulaire (aa 20–358) ; l'anticorps peut reconnaître à la fois l'IL-6R lié à la membrane et l'sIL6R. Pour la cytométrie en flux intracellulaire, optimisez la fixation et la perméabilisation afin de détecter les réservoirs intracellulaires du récepteur tout en minimisant le bruit de fond provenant des formes solubles.
• Nous recommandons d'inclure des contrôles avec invalidation ou extinction de l'IL-6R afin de confirmer la spécificité de la coloration dans votre système expérimental.
• Le conjugué direct élimine les étapes avec un anticorps secondaire et réduit la durée de l'essai ; toutefois, un titrage est conseillé pour obtenir un rapport signal/bruit optimal dans votre modèle cellulaire spécifique.
• Comme l'sIL6R peut être présent dans les surnageants de culture ou les liquides biologiques, veillez à effectuer un lavage soigneux après la coloration afin d'éliminer les complexes récepteur soluble–anticorps non liés.

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