Anticorps monoclonal Lapin anti-IgG humaine (Fc) pour cytométrie en flux - P01857

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'IgG (Fc)

• La cible est la région constante (Fc) de la chaîne lourde de l'immunoglobuline gamma-1 humaine (IgG1), codée par le gène IGHG1, correspondant aux acides aminés 100-330 de la protéine mature (UniProt P01857). Cette région assure les fonctions effectrices par interaction avec les récepteurs Fc et le complément.
• Les chaînes lourdes d'immunoglobuline sont essentielles à l'immunité adaptative : les Ig liées à la membrane constituent le récepteur des cellules B, tandis que les anticorps sécrétés neutralisent les pathogènes. La région Fc de l'IgG1 déclenche spécifiquement la cytotoxicité cellulaire dépendante des anticorps, la cytotoxicité dépendante du complément et la phagocytose (PubMed:17576170, PubMed:20176268, PubMed:22158414). Références associées : PMID:17576170 PMID:20176268 PMID:22158414
• L'IgG1 est composée de deux chaînes lourdes identiques liées par des ponts disulfures à deux chaînes légères ; chaque chaîne lourde contient un domaine variable (codé par les segments V, D, J) et trois domaines constants (CH1, CH2, CH3). Les domaines CH2 et CH3 forment le fragment Fc ciblé par cet anticorps.
• Le gène IGHG1 fait partie du locus de la chaîne lourde des immunoglobulines sur le chromosome 14, et la recombinaison de commutation de classe de l'IgM/IgD vers l'IgG1 se produit dans les cellules B activées, façonnant le répertoire des anticorps.
• L'IgG1 est l'isotype d'anticorps le plus abondant dans le sérum humain et est essentiel à l'immunité humorale à long terme, souvent utilisée comme échafaudage pour les anticorps thérapeutiques.
• Localisation subcellulaire : les chaînes lourdes d'IgG1 sont sécrétées sous forme d'anticorps ou exposées à la surface des cellules B sous forme d'immunoglobulines liées à la membrane (forme transmembranaire).
• Les modifications post-traductionnelles incluent la formation de ponts disulfures et la N-glycosylation sur le domaine CH2 conservé, qui est essentielle pour la liaison au récepteur Fc et la stabilité.
• Mots-clés : immunité adaptative, sécrété, membrane cellulaire, glycoprotéine, domaine immunoglobuline, pont disulfure.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'anticorps est conjugué à l', un fluorophore photostable avec des maxima d'excitation/émission d'environ 590/617 nm, compatible avec les cytomètres en flux standard. Assurez-vous de régler correctement les paramètres de l'instrument et la compensation.
• Pour la cytométrie en flux, réalisez une titration de l'anticorps pour déterminer la concentration de coloration optimale (généralement 0,5-5 µg pour 10^6 cellules) en utilisant des cellules témoins positives et négatives exprimant l'IgG humaine (par exemple, lymphocytes B humains ou lignées cellulaires exprimant l'IgG membranaire).
• L'anticorps reconnaissant la région Fc, il peut se lier à l'IgG libre dans le sérum ou le milieu de culture ; lavez soigneusement les cellules pour réduire le bruit de fond.
• Ce clone peut être utilisé pour détecter l'IgG de surface sur les lymphocytes B humains, ou pour identifier les particules recouvertes d'IgG ou les complexes immuns dans un contexte de recherche.
• Évitez une fixation/perméabilisation trop dure qui pourrait altérer l'épitope Fc ; une fixation douce au paraformaldéhyde (1-4 %) est généralement compatible.
• Utilisez des réactifs de blocage des récepteurs Fc lors de la coloration de cellules exprimant fortement le FcγR pour prévenir la liaison non spécifique.
• Envisagez de valider la réactivité croisée avec d'autres sous-classes d'IgG (IgG2, IgG3, IgG4) si nécessaire, car les séquences de la région Fc partagent une homologie élevée.

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