Anticorps monoclonal de lapin anti-FAP humain pour CF - Q12884

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la prolyl endopeptidase FAP

• La prolyl endopeptidase FAP (FAP) est une sérine protéase glycoprotéique de surface cellulaire, également connue sous le nom d'alpha de protéine d'activation des fibroblastes, seprase et gélatinase liée à la membrane du mélanome de 170 kDa. Plusieurs isoformes existent dues à l'épissage alternatif.
• La FAP présente à la fois une activité endopeptidasique clivante après proline et une activité dipeptidyl peptidasique. L'activité endopeptidasique cible des substrats présentant les séquences Ala/Ser-Gly-Pro-Ser/Asn/Ala, comme l'alpha-2-antiplasmine et SPRY2. Références associées : PMID:14751930, PMID:16223769, PMID:16410248
• L'activité dipeptidyl peptidasique hydrolyse les liaisons prolyles des dipeptides synthétiques et agit sur les neuropeptides naturels incluant NPY, PYY, la substance P et BNP32. Références associées : PMID:10347120, PMID:10593948, PMID:16175601, PMID:21314817
• La FAP dégrade la gélatine et le collagène de type I dénaturé par la chaleur, mais pas les collagènes natifs de type I et IV, la vitronectine, la ténascine, la laminine, la fibronectine, la fibrine ou la caséine, contribuant au remodelage de la matrice extracellulaire. Références associées : PMID:10347120, PMID:10455171, PMID:12376466
• Grâce à ses activités protéasiques, la FAP régule la protéolyse péricellulaire, favorisant l'adhésion, la migration et l'invasion cellulaires. Elle joue un rôle dans le remodelage tissulaire, la fibrose, la cicatrisation, l'inflammation et la progression tumorale, notamment en améliorant l'angiogenèse et l'échappement immunitaire.
• Au niveau sous-cellulaire, la FAP se localise à la surface cellulaire et à la membrane, en particulier dans les projections cellulaires comme les lamellipodes, les invadopodes et les crêtes. Des formes solubles sont également sécrétées dans l'espace extracellulaire et détectées dans le cytoplasme.
• L'expression tissulaire est largement restreinte aux fibroblastes activés dans des conditions pathologiques : plaies en cours de cicatrisation, foie cirrhotique (cellules étoilées hépatiques), tissus synoviaux enflammés et stroma réactif des cancers épithéliaux. Elle est fortement exprimée dans les cellules de gliome et les lignées de mélanome, mais absente du foie normal. Le tissu adipeux exprime également la FAP.
• Les modifications post-traductionnelles incluent la glycosylation et la formation de ponts disulfures, et la FAP est synthétisée sous forme de protéine membranaire de type II à passage unique avec un ancre signal.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Cet anticorps est conçu pour des applications en cytométrie en flux (CF). L'immunogène couvre les acides aminés 26-760 de la FAP humaine, incluant le domaine extracellulaire. Le fluorophore permet une détection directe sans réactifs secondaires, réduisant le bruit de fond.
• Pour le marquage de surface cellulaire sur cellules vivantes, incubez avec l'anticorps sur glace dans un tampon de blocage. Pour la détection de FAP intracellulaire ou totale, prévoyez des protocoles de fixation et perméabilisation.
• La concentration optimale d'anticorps doit être déterminée par titration dans le système cellulaire concerné. Utilisez des contrôles d'isotype appropriés et des colorants de viabilité pour exclure les cellules mortes de l'analyse.
• La FAP étant exprimée sur les fibroblastes activés du stroma tumoral et des tissus en cours de cicatrisation, utilisez des contrôles positifs et négatifs appropriés (par exemple, fibroblastes associés au cancer positifs pour la FAP contre fibroblastes de tissu normal ou lignées cellulaires négatives pour la FAP).
• En raison d'un détachement potentiel, des formes sécrétées de FAP peuvent être présentes dans le surnageant ; pour un marquage de surface précis, lavez soigneusement les cellules avant le marquage.

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