Anticorps monoclonal de lapin anti-DC-SIGNR/CD299 humain pour cytométrie en flux - Q9H2X3

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de DC-SIGNR

• DC-SIGNR (CD299), codé par le gène CLEC4M, est un récepteur de type lectine C transmembranaire de type II. L’épissage alternatif produit à la fois des isoformes liées à la membrane et des isoformes sécrétées, la protéine jouant un rôle dans la surveillance immunitaire et la reconnaissance des agents pathogènes.
• Il agit comme un récepteur de reconnaissance des agents pathogènes (PRR) capable de se lier aux glucides riches en mannose présents sur les agents pathogènes, en assurant leur endocytose puis leur dégradation dans les lysosomes. DC-SIGNR se lie également à ICAM3 sur les lymphocytes T, facilitant ainsi les interactions immunitaires.
• Il sert de récepteur d’attachement pour un large éventail de virus, notamment le VIH-1, le virus de l’hépatite C (VHC), le SARS-CoV, le virus Ebola, le virus de la grippe, le coronavirus humain 229E, le cytomégalovirus, le virus du Nil occidental, le virus de l’encéphalite japonaise et le virus de Marburg, soulignant son rôle dans la pathogenèse virale.
• L’expression tissulaire est principalement observée dans les cellules endothéliales sinusoïdales du foie, les ganglions lymphatiques, l’endothélium placentaire, les cellules alvéolaires de type II et les cellules endothéliales pulmonaires. Il est notamment absent des macrophages, ce qui le distingue de son homologue proche DC-SIGN.
• Le domaine extracellulaire (acides aminés 71–399) contient une région de répétitions en tandem et un domaine de reconnaissance des glucides de type lectine C (CRD) qui se lie aux résidus de mannose de manière dépendante du calcium, ce qui est essentiel pour l’interaction avec les agents pathogènes.
• Les modifications post-traductionnelles comprennent la glycosylation liée à l’azote et la formation de ponts disulfure, essentielles au repliement correct, à la stabilité et à l’activité de liaison aux ligands.
• Au niveau subcellulaire, DC-SIGNR se localise principalement sur la membrane plasmique, mais une forme soluble sécrétée générée par épissage alternatif est également présente dans les fluides extracellulaires.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L’immunogène couvre l’intégralité du domaine extracellulaire (aa 71–399), garantissant que l’anticorps reconnaît la conformation native et le domaine de reconnaissance des glucides de DC-SIGNR. Il convient donc à la détection des formes liées à la membrane et sécrétées.
• Pour la cytométrie en flux (FC), envisagez d’utiliser des cellules endothéliales sinusoïdales hépatiques humaines ou des lignées cellulaires transfectées par CLEC4M comme contrôles positifs. Incluez un contrôle d’isotype approprié ainsi qu’un blocage des récepteurs Fc afin de minimiser les liaisons non spécifiques.
• Le conjugué offre une fluorescence intense avec un photoblanchiment minimal ; effectuez un titrage de l’anticorps afin de déterminer la concentration optimale pour vos cellules et les réglages de votre instrument. Réalisez une compensation appropriée en cas d’utilisation dans des panels multicolores.
• DC-SIGNR pouvant être libéré, évaluez la coloration de surface par rapport à la coloration totale avec perméabilisation afin de détecter, si nécessaire, les pools intracellulaires ou sécrétés.

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