Anticorps monoclonal lapin anti-cytokératine 8 humaine pour cytométrie en flux intracellulaire - P05787

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la cytokératine 8

• La kératine 8 (K8/CK8), codée par le gène KRT8, est une protéine du filament intermédiaire de type II qui forme des hétéropolymères obligatoires avec son partenaire de type I KRT18 dans les cellules épithéliales simples (PubMed:26823019).
  Références associées : PMID:26823019
• La KRT8 apporte stabilité mécanique et résistance aux épithélions et protège les cellules contre les stress non mécaniques, tels que l'apoptose (Par similarité).
• Elle est nécessaire à la formation de fibres de stress actines médiée par ARHGEF40 et au renforcement des fibres de stress induit par la force de tension (PubMed:26823019).
  Références associées : PMID:26823019
• Dans le muscle strié, KRT8 et KRT19 peuvent lier l'appareil contractile à la dystrophine au niveau des costamères (PubMed:16000376).
  Références associées : PMID:16000376
• La localisation sous-cellulaire est majoritairement dans le cytosquelette cytoplasmique, mais elle est également détectée dans le nucléoplasme et la matrice nucléaire.
• Les modifications post-traductionnelles incluent l'acétylation, la phosphorylation, la méthylation, l'ubiquitination et la glycosylation, qui modulent son assemblage et sa fonction.
• Spécificité tissulaire : exprimée dans les épithélions simples (par exemple la muqueuse gingivale, le palais dur) et dans les fibres musculaires au niveau des costamères.
• Pertinence clinique : associée à des variants pathologiques et aux interactions hôte-virus, ce qui souligne son rôle en pathologie.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Pour la cytométrie en flux intracellulaire, fixez et perméabilisez les cellules selon des protocoles optimisés (par exemple 4 % de PFA suivi d'un traitement par 0,1 % de Triton X-100 ou des tampons à base de saponine) pour permettre à l'anticorps d'accéder au réseau de kératine cytosolique.
• Réalisez un titrage de l'anticorps marqué à l'pour déterminer la concentration de coloration optimale ; les dilutions initiales typiques sont comprises entre 1:50 et 1:200, mais elles varient selon le type cellulaire.
• Utilisez des anticorps de contrôle isotypique appropriés pour définir les seuils de tri et confirmer la spécificité de la coloration KRT8.
• Les cellules HeLa ou d'autres lignées cellulaires épithéliales simples (par exemple MCF-7) peuvent servir de contrôle positif du fait de leur forte expression de KRT8 ; si possible, utilisez des cellules knock-out ou knock-down comme contrôle négatif.
• Protégez l'anticorps d'une exposition prolongée à la lumière pour éviter le photoblanchiment du fluorophore pendant la coloration et l'acquisition.
• L'immunogène couvre presque la totalité de la longueur de KRT8 (acides aminés 1-483), ce qui suggère que l'anticorps reconnaît probablement la conformation native ; cependant, la validation pour d'autres applications (par exemple WB, IHC) n'a pas été fournie et doit être vérifiée indépendamment.

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