Anticorps monoclonal lapin anti-humain CD62E/E-Selectine pour cytométrie en flux - P16581

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la E-sélectine

• La E-sélectine, également appelée CD62E, ELAM-1 ou LECAM2, est une glycoprotéine de surface cellulaire codée par le gène SELE. Elle appartient à la famille des sélectines de molécules d'adhésion, caractérisée par un domaine lectine N-terminal, un domaine de type EGF et de multiples répétitions sushi (protéine de contrôle du complément).
• La fonction principale de la E-sélectine est de médier l'adhésion des leucocytes à l'endothélium activé lors de l'inflammation. Elle reconnaît et se lie à des ligands glucidiques spécifiques, notamment le sialyl-Lewis X, sur les neutrophiles, les monocytes et les lymphocytes T mémoires.
• La E-sélectine n'est pas exprimée de manière constitutive ; sa transcription est induite par des cytokines telles que le facteur de nécrose tumorale alpha (TNF-α) et l'interleukine-1 (IL-1). Cette expression étroitement régulée garantit une réponse d'adhésion rapide et transitoire sur les sites de lésion ou d'infection.
• Au-delà de son rôle dans la surveillance immunitaire, la E-sélectine a été impliquée dans la morphogenèse capillaire, suggérant une fonction dans l'angiogenèse et le remodelage vasculaire.
• La protéine est une glycoprotéine transmembranaire de type I, ancrée dans la membrane plasmique dont les domaines de liaison au ligand sont exposés à la surface cellulaire. Sa région extracellulaire contient de multiples domaines stabilisés par des ponts disulfures et des sites de liaison au calcium.
• Les caractéristiques structurales clés comprennent un domaine lectine de type C N-terminal responsable de la reconnaissance des glucides dépendante du calcium, suivi d'un seul domaine de type facteur de croissance épidermique (EGF) et de six répétitions consensus courtes (domaines sushi). La courte queue cytoplasmique peut interagir avec le cytosquelette et les molécules de signalisation intracellulaire.
• La E-sélectine subit des modifications post-traductionnelles, notamment la N-glycosylation et la formation de ponts disulfures intrachaînes, qui sont essentiiels à son repliement correct et à son activité de liaison au ligand.

Conseils expérimentaux et indications techniques

• Cet anticorps a été développé en utilisant un immunogène correspondant à la région extracellulaire (acides aminés 22-230) de la E-sélectine humaine, qui englobe les domaines lectine et de type EGF. Cette conception favorise les épitopes accessibles dans les conformations natives, ce qui rend ce clone parfaitement adapté aux applications de cytométrie en flux.
• Pour la coloration en cytométrie en flux, utilisez une suspension de cellules individuelles préparée à partir de cellules endothéliales activées ou de populations de leucocytes. Pensez à titrer l'anticorps pour déterminer le rapport signal sur bruit optimal pour votre système d'étude spécifique.
• Incluez des contrôles d'isotype appropriés et une discrimination cellules vivantes/cellules mortes pour garantir la spécificité. L'expression de la E-sélectine peut être faible sur les cellules au repos, donc une stimulation par cytokine (par exemple, traitement au TNF-α) est recommandée pour augmenter l'expression de la cible.
• Le conjugué est compatible avec les lignes laser rouge/orange courantes (par exemple, 561 nm ou 594 nm) et peut être associé à d'autres fluorophores dans des panels multicolores. Validez les paramètres de compensation du recouvrement spectral sur votre instrument.
• Protégez toujours les anticorps conjugués de la lumière et évitez les cycles répétés de congélation-décongélation pour préserver la stabilité du fluorophore.

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