Anticorps monoclonal de lapin anti-CD55 humain pour cytométrie en flux - P08174

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de CD55 (Facteur accélérant la dégradation du complément)

• CD55, également appelé facteur accélérant la dégradation (DAF), est une protéine membranaire ancrée par glycosylphosphatidylinositol (GPI) appartenant à la famille des régulateurs de l'activation du complément (RCA).
• Il reconnaît les fragments C4b et C3b déposés sur la surface cellulaire et interfère avec leur capacité à catalyser la conversion de C2 et du facteur B, empêchant ainsi la formation des convertases d'amplification C4b2a et C3bBb. Références associées : PMID:7525274
• En déstabilisant et inhibant l'assemblage des convertases C3 et C5, CD55 protège les cellules autologues de la lyse médiée par le complément et des dommages tissulaires. Références associées : PMID:28657829
• Au-delà de la régulation du complément, CD55 agit comme récepteur cellulaire pour divers picornavirus, notamment le coxsackievirus A21, les coxsackievirus B1, B3, B5, l'entérovirus humain 70 et D68, ainsi que les échovirus 6, 7, 11, 12, 20 et 21.
• Il est exprimé sur la membrane plasmique de pratiquement toutes les cellules en contact avec les protéines du complément plasmatique, ainsi que sur les cellules épithéliales tapissant les compartiments extracellulaires ; des formes solubles sont également présentes dans les fluides corporels et la matrice extracellulaire.
• La protéine contient plusieurs sites de N-glycosylation et quatre domaines sushi (CCP) N-terminaux, essentiels à la liaison du ligand ; l'épissage alternatif génère des variants ancrés au GPI et des variants sécrétés.
• Cliniquement, les mutations de CD55 sont associées au syndrome CHAPLE (hyperactivation du complément, thrombose angiopathique et entéropathie avec perte de protéines), et la molécule porte les antigènes du groupe sanguin de Cromer.
• Le polypeptide mature a une masse prédite d'environ 41 kDa, mais une glycosylation étendue génère un profil de bandes hétérogènes allant de 39 kDa à 59 kDa en western blotting.

Recommandations expérimentales et conseils techniques

• L'immunogène couvre l'ensemble du domaine extracellulaire (aa 35–353), ce qui suggère que l'anticorps se lie au CD55 natif sur les cellules vivantes ; validez la coloration dans des conditions non perméabilisantes pour la détection de surface.
• Pour la cytométrie en flux, titrez l'anticorps dans une gamme de 0,1 à 5 µg/mL sur des cellules mononucléées du sang périphérique humain ou des lignées cellulaires transfectées par CD55 pour déterminer la concentration optimale.
• Incluez des contrôles d'isotype appropriés et des réactifs de blocage des récepteurs Fc pour minimiser la liaison non spécifique, en particulier dans les échantillons à forte expression de FcγR.
• Comme CD55 est excrété de la membrane, prévoyez de colorer à la fois les cellules primaires et les surnageants correspondants si vous étudiez les formes solubles.
• Vérifiez la réactivité croisée dans votre système expérimental spécifique ; l'anticorps est décrit comme réagissant avec le CD55 humain, mais ses performances chez les primates non humains ou les modèles rongeurs doivent être confirmées individuellement.

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