Anticorps monoclonal lapin anti-humain CD34 pour IF/ICC et cytométrie en flux - P28906

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de CD34

• L'antigène CD34 des cellules progénitrices hématopoïétiques, codé par le gène CD34, est un marqueur bien établi des cellules souches et progénitrices hématopoïétiques, et marque également l'endothélium des petits vaisseaux.
• L'épissage alternatif génère plusieurs isoformes : l'isoforme canonique a un poids moléculaire calculé d'environ 41 kDa (UniProt : 40 716 Da), tandis qu'une variante plus courte de 35 kDa peut provenir d'un traitement post-traductionnel ou de différences entre isoformes.
• CD34 est une glycoprotéine transmembranaire de type I à passage unique qui fonctionne probablement comme molécule d'adhésion, médiant l'attachement des cellules souches à la matrice extracellulaire de la moelle osseuse ou aux cellules stromales au cours de l'hématopoïèse précoce.
• Il peut servir d'échafaudage pour les glycanes spécifiques de lignée, présentant des ligands glucidiques aux sélectines et facilitant les interactions cellule-cellule.
• La localisation subcellulaire est principalement au niveau de la membrane cellulaire, ce qui est cohérent avec son rôle dans l'adhésion extracellulaire et la signalisation.
• La protéine est soumise à de nombreuses modifications post-traductionnelles, notamment la glycosylation N- et O-liée (glycoprotéine) et la phosphorylation, qui peuvent réguler sa fonction et ses propriétés de liaison.
• L'expression est hautement sélective : CD34 est présent sur les cellules progénitrices hématopoïétiques de la moelle osseuse et du sang périphérique, ainsi que sur l'endothélium des petits vaisseaux dans de nombreux tissus.
• La région extracellulaire (y compris les acides aminés 170–290 utilisés comme immunogène) contient de multiples sites de glycosylation et est exposée à la surface cellulaire, ce qui en fait une cible accessible pour la détection par anticorps.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• L'immunogène correspond à la région extracellulaire (aa 170–290) du CD34 humain, garantissant la reconnaissance de l'antigène natif de surface ; cet anticorps est validé pour les applications IF/ICC et cytométrie en flux.
• Pour la coloration par immunofluorescence, fixez et perméabilisez les cellules de manière appropriée ; envisagez d'utiliser un protocole sans perméabilisation si vous souhaitez détecter le CD34 de surface.
• En cytométrie en flux, incluez des contrôles d'isotype appropriés et des étapes de blocage des récepteurs Fc pour minimiser la liaison non spécifique ; titrez l'anticorps pour déterminer la concentration optimale pour votre système cellulaire.
• L'expression de CD34 est limitée à des types cellulaires spécifiques ; utilisez des contrôles positifs bien caractérisés (par ex. cellules KG-1a, HUVEC ou progéniteurs hématopoïétiques CD34+) et des contrôles négatifs (par ex. lymphocytes, globules sanguins matures) pour confirmer la spécificité.
• Bien que ce conjugué soit conçu pour l'IF/ICC et la FC, si vous explorez d'autres applications (par ex. IHC, WB), validez l'anticorps dans ces conditions et tenez compte des différences potentielles de conformation de l'antigène.

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