Anticorps monoclonal de lapin anti-CD34 humain pour cytométrie en flux - P28906

Spécifications et paramètres essentiels du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de CD34

• CD34, également appelé antigène CD34 des cellules progénitrices hématopoïétiques, est une protéine membranaire de type I à passage unique qui appartient à la famille CD34. Elle subit un épissage alternatif, donnant naissance à des isoformes présentant des poids moléculaires apparents d’environ 35 kDa et 41 kDa.
• Il fonctionne comme une molécule d’adhésion cellulaire et joue un rôle essentiel dans l’hématopoïèse précoce en favorisant l’attachement des cellules souches/progénitrices hématopoïétiques à la matrice extracellulaire de la moelle osseuse et aux cellules stromales.
• CD34 peut agir comme une structure porteuse présentant des glycanes spécifiques de la lignée, permettant aux cellules souches de se lier aux lectines exprimées par les cellules stromales ou d’autres composants de la moelle, régulant ainsi la localisation et la rétention cellulaires.
• Il présente des ligands glucidiques aux sélectines, ce qui favorise davantage l’adhésion et la migration cellulaires au sein de la niche hématopoïétique.
• La protéine est exprimée sélectivement à la surface des cellules progénitrices hématopoïétiques et sur l’endothélium des petits vaisseaux de divers tissus, ce qui en fait un marqueur clé pour l’isolement des cellules souches et les études de biologie vasculaire.
• La localisation subcellulaire se situe principalement au niveau de la membrane plasmique, ce qui est cohérent avec son rôle dans les interactions cellule-cellule et cellule-matrice.
• Les modifications post-traductionnelles comprennent une glycosylation N- et O-liée étendue, une phosphorylation, ainsi que la présence d’un peptide signal et d’un domaine transmembranaire.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• Cet anticorps est conçu pour la cytométrie en flux (FC) et est directement conjugué à , un fluorophore excitable par un laser violet ; aucun réactif de détection secondaire n’est requis, ce qui réduit le nombre d’étapes expérimentales et le bruit de fond.
• L’immunogène couvre les acides aminés 170 à 290 du CD34 humain, dans la région extracellulaire, ce qui suggère que l’anticorps reconnaît un épitope extracellulaire sur les cellules vivantes ; il convient d’envisager une manipulation douce des cellules afin de préserver l’intégrité de l’antigène de surface.
• Pour les applications de cytométrie en flux, effectuez un titrage de l’anticorps afin de déterminer la concentration optimale pour votre type cellulaire et vos conditions de marquage, et incluez des contrôles isotypiques appropriés ainsi que des contrôles « fluorescence moins un » (FMO).
• Validez les performances avec des cellules humaines CD34 positives connues, telles que les lignées cellulaires KG-1a ou MOLM-13, ou avec des cellules progénitrices hématopoïétiques primaires, et envisagez un co-marquage avec d’autres marqueurs de cellules souches afin d’évaluer les sous-populations progénitrices.
• Les poids moléculaires prédits de 35 kDa et 41 kDa peuvent correspondre à des isoformes différemment glycosylées ; ces informations peuvent être utilisées pour confirmer la spécificité en western blot si l’anticorps est validé pour cette application, mais la recommandation principale reste la cytométrie en flux.

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