Anticorps monoclonal de lapin anti-CD33 humain pour cytométrie en flux - P20138

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du CD33

• L'antigène de surface des cellules myéloïdes CD33 (Siglec-3, gp67) est un récepteur transmembranaire de type 1 appartenant à la famille des lectines de type immunoglobuline liant l'acide sialique (Siglec). Il est codé par le gène CD33.
• Le CD33 médie les interactions cellule-cellule et maintient les cellules immunitaires dans un état de repos en reconnaissant et se liant préférentiellement aux glycanes porteurs d'acide sialique liés en alpha-2,3 et alpha-2,6. Références associées : PMID: 10611343, PMID: 11320212, PMID: 15597323, PMID: 7718872
• Lors de l'engagement du ligand (par exemple, C1q ou des glycoprotéines sialylées), les motifs inhibiteurs à base de tyrosine associés aux immunorecepteurs (ITIM) de la queue cytoplasmique sont phosphorylés par des kinases de type Src comme LCK, créant des sites d'ancrage pour les protéines tyrosine phosphatases PTPN6/SHP-1 et PTPN11/SHP-2. Références associées : PMID: 10887109, PMID: 28325905, PMID: 10206955, PMID: 10556798
• Les phosphatases recrutées déphosphorylent les molécules de signalisation en aval, avec un effet répresseur dépendant de la phosphoinositide 3-kinase / PI3K. Références associées : PMID: 15597323
• Le CD33 est majoritairement exprimé à la surface des cellules des lignées monocytaire et myéloïde (monocytes, macrophages, granulocytes) et, dans le cerveau, sur les cellules microgliales.
• Au niveau sous-cellulaire, le CD33 se localise sur la membrane cellulaire et dans les peroxysomes. Il contient un peptide signal, un domaine de type V immunoglobuline et une hélice transmembranaire.
• La protéine subit un épissage alternatif et des modifications post-traductionnelles, notamment la phosphorylation, la glycosylation N-liée et la formation de ponts disulfures. Le poids moléculaire prédit est d'environ 39,8 kDa, mais plusieurs bandes (25 kDa, 33 kDa, 39 kDa) sont observées en raison de la glycosylation différentielle et de l'expression d'isoformes.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène (acides aminés 18-259) englobe tout le domaine extracellulaire du CD33 humain, favorisant la reconnaissance de la forme native du récepteur à la surface cellulaire.
• Pour la cytométrie en flux, titrez l'anticorps pour déterminer la concentration optimale. Utilisez des lignées cellulaires connues pour être CD33 positives (par exemple THP-1, U937) ou des monocytes du sang périphérique humain comme contrôles positifs.
• Le conjugué permet une détection directe sans réactifs secondaires. Protégez l'anticorps de la lumière et évitez les cycles de congélation-décongélation répétés pour préserver l'intensité de fluorescence.
• Si un marquage intracellulaire est nécessaire (par exemple pour la localisation peroxysomale), prévoyez des protocoles de fixation et de perméabilisation compatibles avec le fluorophore.

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