Anticorps monoclonal de lapin anti-humain CD326/EPCAM conjugué pour cytométrie en flux - P16422

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la molécule d'adhésion des cellules épithéliales

• La molécule d'adhésion des cellules épithéliales (EPCAM), également désignée CD326, est une glycoprotéine transmembranaire de type I et un membre de la famille des transducteurs de signal calcique associés aux tumeurs.
• Elle médie l'adhésion cellulaire homophile entre les cellules épithéliales intestinales (IEC) et les lymphocytes intraépithéliaux (IEL) au niveau de l'épithélium muqueux, constituant une barrière immunologique contre les infections muqueuses.
• EPCAM joue un rôle dans la prolifération et la différenciation des cellules souches embryonnaires, en régulant positivement l'expression de FABP5, MYC et des cyclines A et E.
• La protéine se localise à la membrane cellulaire latérale et aux jonctions serrées, ce qui correspond à sa fonction adhésive.
• Elle est fortement exprimée dans les cellules souches embryonnaires non différenciées, son niveau diminuant rapidement après différenciation ; elle est également présente sur presque toutes les membranes des cellules épithéliales, mais absente des membranes des cellules mésodermiques et neurales.
• EPCAM est fréquemment surexprimée à la surface des adénocarcinomes, ce qui en fait un antigène tumoral et une cible pour le diagnostic et la thérapie du cancer.
• Les modifications post-traductionnelles comprennent la formation de ponts disulfure et la glycosylation, et la protéine contient un peptide signal et une hélice transmembranaire.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène couvre le domaine extracellulaire (acides aminés 24–265), ce qui suggère que l'anticorps cible un épitope accessible à la surface cellulaire, adapté à la cytométrie en flux sans perméabilisation.
• Pour la cytométrie en flux, titrez l'anticorps pour déterminer la concentration optimale pour votre système expérimental, et incluez des contrôles isotypiques appropriés pour évaluer la liaison non spécifique.
• Utilisez une centrifugation à basse vitesse et une remise en suspension douce pour préserver la viabilité cellulaire, car EPCAM est un antigène de surface ; évitez une digestion enzymatique agressive qui pourrait cliver les épitopes extracellulaires.
• En raison de la conjugaison du fluorophore, protégez les échantillons de la lumière et analysez-les rapidement pour minimiser la photodécoloration.
• Validez la réactivité dans des lignées cellulaires d'origine épithéliale connues pour exprimer EPCAM, telles que MCF-7 (adénocarcinome mammaire) ou HT-29 (adénocarcinome colorectal), en notant que les niveaux d'expression peuvent varier selon l'état de différenciation.
• Étant donné qu'EPCAM est un antigène tumoral, envisagez des stratégies de gating pour distinguer les cellules épithéliales des populations non épithéliales dans des échantillons mixtes.

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