Anticorps monoclonal de lapin anti-CD28 humain pour la cytométrie en flux et la stimulation des cellules T - P10747

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du CD28

• Le CD28 (glycoprotéine de surface spécifique des cellules T CD28, également connue sous le nom de Tp44) est un membre de la superfamille des immunoglobulines et fonctionne comme un récepteur de costimulation essentiel pour l'activation, la prolifération et la survie des cellules T.
• La liaison du CD28 par ses ligands CD80 (B7-1) ou CD86 (B7-2) fournit un second signal critique qui amplifie la signalisation du récepteur des cellules T (TCR), conduisant à une production accrue d'interleukine-2 (IL-2) et à l'expansion des cellules T. Références associées : PMID:1650475, PMID:12196291, PMID:35397202
• La signalisation du CD28 recrute la protéine kinase C-thêta (PRKCQ) et l'adaptateur GRB2, activant NF-κB via des voies dépendantes et indépendantes de PI3K/Akt pour moduler l'expression des gènes dans les cellules T. Références associées : PMID:24665965, PMID:21964608, PMID:7568038
• Conjointement avec la costimulation par TCR/CD3 et CD40L, le CD28 améliore la production des cytokines Th2 IL-4 et IL-10, contribuant aux réponses immunitaires humorales. Références associées : PMID:8617933
• Le CD28 agit en synergie avec le CD40L pour activer NF-κB et les kinases en aval MAPK8 et PAK2, diversifiant davantage les fonctions effectrices des cellules T. Références associées : PMID:15067037
• Le CD28 est principalement exprimé à la surface cellulaire des cellules T et des plasmocytes, mais est absent des cellules B moins matures.
• La protéine CD28 est une glycoprotéine transmembranaire avec un domaine extracellulaire de type immunoglobuline, une hélice transmembranaire unique et une queue cytoplasmique contenant des motifs de signalisation. Les modifications post-traductionnelles comprennent des ponts disulfure, une glycosylation et une phosphorylation.
• L'épissage alternatif génère de multiples isoformes du CD28, qui peuvent affiner les signaux de co-stimulation dans différents sous-ensembles de cellules T.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène, la protéine recombinante du CD28 humain, couvre probablement le domaine extracellulaire, ce qui rend l'anticorps adapté à la détection du CD28 natif à la surface cellulaire par cytométrie en flux. Effectuez un titrage sur des lignées de cellules T humaines ou des PBMC pour déterminer la dilution de travail optimale.
• Pour l'activation des cellules T in vitro, utilisez l'anticorps en combinaison avec un anti-CD3 pour fournir des signaux de costimulation. Les formats liés à la plaque ou réticulés peuvent améliorer le regroupement ; des expériences pilotes doivent optimiser la concentration et la durée de stimulation.
• Lors de l'utilisation de cet anticorps pour un blocage fonctionnel ou une déplétion, pré-incubez avec de la protéine CD28 recombinante pour confirmer la spécificité des effets observés.
• Les stratégies de gating en cytométrie en flux doivent inclure une discrimination vivant/mort et des contrôles isotypiques appropriés pour quantifier avec précision l'expression du CD28 sur les sous-ensembles de cellules T.
• Validez la réactivité croisée dans votre système expérimental ; l'anticorps est rapporté comme réagissant avec le CD28 humain, mais une liaison non spécifique doit être exclue dans le contexte de l'échantillon pertinent.

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