Anticorps monoclonal de lapin anti-CD228/MFI2 humain pour cytométrie en flux - P08582

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation du CD228/MFI2

• Encodé par le gène MELTF (également appelé MAP97, MFI2), la mélanotransferrine est une glycoprotéine de surface cellulaire appartenant à la famille des transferrines. L'épissage alternatif produit des isoformes : la protéine complète d'environ 80 kDa et une isoforme sécrétée d'environ 32 kDa.
• Elle intervient dans l'absorption cellulaire du fer : elle se lie à un ion ferrique par sous-unité, s'internalise puis retourne à la membrane plasmique ; elle pourrait également transporter le zinc.
• Initialement identifiée comme l'antigène p97 associé au mélanome, elle est principalement exprimée dans les mélanomes humains, certains tissus fœtaux, le foie, l'épithélium, le cordon ombilical, le placenta et les canaux des glandes sudoripares.
• Elle est ancrée à la membrane cellulaire par un groupement GPI C-terminal, agissant comme un transporteur ancré à des lipides plutôt que comme un porteur soluble.
• Les modifications post-traductionnelles incluent des ponts disulfures, une glycosylation et une phosphorylation, comme l'ont identifié les études protéomiques.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène couvre les acides aminés 20-708, englobant quasiment tout le domaine extracellulaire complet ; vérifiez la réactivité avec le CD228 natif et recombinant dans votre panel de cytométrie en flux.
• En tant qu'anticorps directement conjugué, aucun réactif secondaire n'est nécessaire ; réalisez un titrage entre 0,1 et 1 µg par million de cellules pour déterminer l'indice de coloration optimal.
• Validez la spécificité en utilisant des cellules avec extinction du gène CD228 ou une lignée cellulaire négative connue ; contrôlez la viabilité et excluez les doublets pour éviter les artéfacts causés par les cellules mourantes à haute autofluorescence.
• Les protéines ancrées par GPI peuvent être sensibles à la trypsine ; préparez des suspensions de cellules isolées avec une dissociation enzymatique ou mécanique douce si vous travaillez avec des lignées cellulaires adhérentes.

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