Anticorps monoclonal de lapin anti-CD146 humain conjugué pour cytométrie en flux (FC) - P43121

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de CD146

• CD146, également désigné MUC18 ou MCAM, est une glycoprotéine de surface cellulaire appartenant à la superfamille des immunoglobulines, codée par le gène MCAM (GeneID : 4162). L'épissage alternatif produit plusieurs isoformes.
• Il médie une adhésion cellulaire indépendante du calcium et contribue à l'intégrité de la monocouche endothéliale au niveau des jonctions intercellulaires dans le tissu vasculaire.
• Dans le mélanome, l'expression de CD146 permettrait aux cellules tumorales d'interagir avec l'endothélium vasculaire, favorisant ainsi la dissémination hématogène et les métastases.
• La protéine agit comme un récepteur de surface, et la liaison du ligand déclenche la phosphorylation tyrosine de FYN et PTK2/FAK1, ainsi qu'une augmentation transitoire des niveaux de calcium intracellulaire.
• Au cours de l'embryogenèse, CD146 peut agir comme une molécule d'adhésion guidant la migration des cellules de la crête neurale.
• Les études d'immunolocalisation montrent CD146 sur la membrane plasmique ; sa région extracellulaire contient des domaines de type immunoglobuline, des sites de glycosylation N-liés et des ponts disulfures, tandis que la queue cytoplasmique subit une phosphorylation.
• Le poids moléculaire prédit est d'environ 71,6 kDa ; cependant, la protéine glycosylée mature migre comme une bande de 57–71 kDa en SDS-PAGE.
• Dans les tissus adultes normaux, CD146 est restreint aux cellules musculaires lisses et aux cellules endothéliales, mais il est fortement régulé à la hausse dans les mélanomes primaires avancés et les lésions métastatiques, ce qui en fait un marqueur de progression tumorale.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène (aa 24-559) couvre l'intégralité du domaine extracellulaire du CD146 humain. Cet anticorps est donc censé reconnaître la protéine native de surface cellulaire dans des cellules vivantes non fixées — une exigence critique pour les applications de cytométrie en flux.
• Titrez l'anticorps dans votre test de cytométrie en flux pour établir une concentration optimale qui donne une séparation claire entre les populations positives et négatives.
• Incluez toujours des témoins isotypiques appropriés, des témoins de compensation monocouleur et un colorant de viabilité pour exclure les cellules mortes de l'analyse.
• Validez la coloration dans des lignées cellulaires exprimant bien CD146 (par ex., mélanome A375) ou dans des échantillons tumoraux primaires connus pour réguler à la hausse MCAM.
• Comme est un fluorophore sensible à la lumière, stockez le conjugué à l'abri de la lumière, évitez les cycles répétés de congélation-décongélation et centrifugez brièvement avant chaque utilisation pour éliminer les agrégats.

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