Anticorps polyclonal de lapin anti-POLR2A pour WB, IF/ICC, IHC-P, ELISA, ChIP - P24928

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : fonction et localisation de la POLR2A

• La sous-unité RPB1 (POLR2A) de l'ARN polymérase II dirigée par l'ADN est la plus grande sous-unité catalytique de l'ARN polymérase II, essentielle à la transcription des gènes codant des protéines et de nombreux ARN non codants. Références associées : PMID:23748380 PMID:27193682 PMID:30190596 PMID:28108474
• La polymérase catalyse l'ajout d' ribonucléotides dirigé par la matrice, son site actif étant coordonné par des ions magnésium ; elle possède également une activité d'édition exonucléase 3'→5'. Références associées : PMID:8381534 PMID:9852112
• Un domaine C-terminal (CTD) unique contenant 52 répétitions d'heptapeptides agit comme un centre de régulation, la phosphorylation de Ser5 favorisant l'échappement au promoteur et celle de Ser2 favorisant l'élongation et la maturation du pré-ARNm. Références associées : PMID:24207025 PMID:26124092
• Au-delà de la transcription dépendante de l'ADN, la POLR2A peut fonctionner comme une ARN polymérase dépendante de l'ARN, en allongeant des ARN non codants à l'aide d'une matrice interne, ce qui pourrait influencer l'extinction génique.
• Elle est principalement localisée dans le noyau, mais est également présente dans le cytoplasme et sur les chromosomes ; ses modifications post-traductionnelles comprennent l'acétylation, la méthylation, l'ubiquitination et la phosphorylation.
• Les mutations de POLR2A sont associées à des troubles neurodéveloppementaux, et la protéine est ciblée par des virus tels que le virus de l'hépatite delta pour la réplication de leur génome.

Conseils expérimentaux et recommandations techniques

• Pour le Western blot, en raison de la grande taille de la protéine (217 kDa), utiliser un gel de polyacrylamide à 6-8 % et assurer un transfert efficace (par exemple, par transfert humide avec 10 % de méthanol). Un contrôle positif tel qu'un lysat de cellules HeLa ou HEK293 peut être envisagé.
• Pour l'IF/ICC et l'IHC-P, les conditions de fixation et de récupération antigénique doivent être optimisées ; une perméabilisation au Triton X-100 peut être nécessaire pour les cibles nucléaires intracellulaires.
• Pour le ChIP, la localisation de l'épitope dans la région N-terminale suggère une bonne adéquation pour la détection de la POLR2A native, mais une validation avec des gènes cibles positifs et négatifs est recommandée.
• En tant qu'anticorps polyclonal, une constance entre les lots est attendue, mais elle doit être vérifiée dans l'application prévue.

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