Anticorps monoclonal lapin Phospho-Ubiquitine (Ser65) pour WB, IF/ICC, ELISA - P62979 / P62987 / P0CG47 / P0CG48

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de l'ubiquitine

• L'ubiquitine est une protéine de 76 acides aminés très conservée, souvent exprimée sous forme de protéine de fusion avec la protéine ribosomique eS31 (gène RPS27A), puis clivée pour générer de l'ubiquitine libre et le composant ribosomique.
• L'ubiquitine peut être conjuguée à des protéines cibles via des liaisons isopeptidiques, formant des monomères ou des chaînes polyubiquitines liées par différents résidus lysine ; les chaînes liées à la Lys-48 dirigent les protéines vers la dégradation par le protéasome, tandis que les chaînes liées à la Lys-63 régulent l'endocytose, la réparation de l'ADN et la signalisation NF-κB.
• En tant que sous-unité de la sous-unité ribosomique 40S, la protéine de fusion ubiquitine-ribosome participe à la biogenèse des ribosomes et au traitement du pré-ARNr dans le nucléole. Références associées : PMID:9582194, PMID:23636399, PMID:34516797
• L'ubiquitine subit de nombreuses modifications post-traductionnelles, notamment la phosphorylation, l'acétylation et l'ADP-ribosylation, qui modulent ses fonctions cellulaires.
• La protéine de fusion agit également comme une protéine ribosomique fixant le zinc, contenant un motif doigt de zinc de type C4.
• La localisation subcellulaire inclut le cytoplasme, le noyau et le nucléole, ce qui est cohérent avec des rôles à la fois dans la dégradation des protéines cytoplasmiques et l'assemblage des ribosomes nucléaires.

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• Du fait de la nature labile de la phosphorylation, ajoutez des inhibiteurs de phosphatases pendant la préparation des échantillons pour préserver l'épitope phospho-Ser65.
• Vérifiez la spécificité de l'anticorps par traitement des lysats avec une phosphatase ou par compétition avec un peptide non phosphorylé.
• Plusieurs bandes peuvent être détectées car l'ubiquitine est conjuguée à de nombreuses protéines cibles ; les poids moléculaires prévus incluent l'ubiquitine libre (~8,5 kDa) et des conjugués de poids moléculaire plus élevé (bandes observées à ~15, 18, 26 et 77 kDa).
• Pour l'immunofluorescence, optimisez les conditions de fixation et de perméabilisation pour conserver le signal de phosphorylation.

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