pAb lapin Phospho-Src-Y529 pour WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P12931

Spécifications et paramètres clés du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de Src

• La tyrosine-protéine kinase Src proto-oncogène (c-Src) est une tyrosine kinase non récepteur d'environ 60 kDa, codée par le gène SRC (ID gène : 6714). Ses noms alternatifs incluent ASV, SRC1, THC6 et p60-Src. Trois isoformes résultent de l'épissage alternatif, l'isoforme 1 représentant la séquence canonique.
• Src médie la transduction du signal à partir de divers types de récepteurs (immunitaires, intégrines, facteurs de croissance, GPCR), contrôlant la transcription génique, la réponse immunitaire, l'adhésion cellulaire, la progression du cycle, l'apoptose, la migration et la transformation (PubMed:34234773, PubMed:21411625). Références associées : PMID:34234773, PMID:21411625
• Par la phosphorylation de substrats comme AFAP1, la cortactine (CTTN), FAK (PTK2) et la paxilline, Src orchestre la réorganisation du cytosquelette, la dynamique des adhésions focales et la signalisation des jonctions cellule-cellule.
• Src se localise sur la membrane cellulaire, la membrane interne mitochondriale, le noyau, le cytoplasme, le cytosquelette et les jonctions cellulaires, permettant une signalisation spatialement restreinte.
• L'anticorps reconnaît spécifiquement Src phosphorylé au niveau Tyr529, un résidu conservé de la queue C-terminale dont la phosphorylation par la kinase Csk maintient la conformation fermée autoinhibée. La déphosphorylation ou le déplacement de l'interaction pTyr529-SH2 prépare Src à son activation.
• L'expression de Src est ubiquitaire ; cependant, les plaquettes, les neurones et les ostéoclastes présentent des niveaux 5 à 200 fois plus élevés que la plupart des autres tissus. Son expression a également été détectée dans la peau (PubMed:22294297). Références associées : PMID:22294297
• Dans les ostéoclastes, Src est essentiel pour la résorption osseuse, agissant via un complexe PTK2B/PYK2 et phosphorylant CBL pour activer la signalisation PI3K (PubMed:14585963, PubMed:8755529). Il favorise également la production d'énergie en activant le cytochrome c oxydase (PubMed:12615910). Références associées : PMID:14585963, PMID:8755529, PMID:12615910
• Src participe à l'immunité innée antivirale en renforçant la signalisation médiée par RIG-I (PubMed:19419966) et médie la régénération épithéliale induite par l'IL6 via la voie YAP1-NOTCH (PubMed:25731159). Références associées : PMID:19419966, PMID:25731159

Conseils expérimentaux et astuces techniques

• L'immunogène est un phosphopeptide synthétique correspondant à la région Y529 ; assurez-vous que la préparation de l'échantillon préserve la phosphorylation (utilisez des inhibiteurs de phosphatases) et incluez des témoins non phosphorylés pour vérifier la spécificité.
• Pour le Western blot, le poids moléculaire prévu de Src est d'environ 60 kDa ; une bande de cette taille doit être observée. Envisagez d'utiliser un blocage avec 5 % de BSA pour réduire la liaison non spécifique.
• Dans les techniques IHC-P et IF/ICC, les méthodes de récupération d'antigène peuvent affecter la préservation des phospho-épitopes ; une récupération douce à base de citrate et un traitement à basse température sont recommandés.
• La détection ELISA du Phospho-Src-Y529 peut être utilisée en combinaison avec des anticorps Src totaux pour évaluer les niveaux de phosphorylation site-spécifique dans les lysats cellulaires.
• La réactivité croisée avec Src de souris et de rat est attendue sur la base de l'homologie de séquence ; validez dans le système d'échantillon concerné.

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