Phospho-SMO-S616 Lapin pAb - Q99835

Spécifications et paramètres principaux du produit

Contexte biologique : Fonction et localisation de la protéine Smoothened

• La protéine Smoothened (SMO), également connue sous le nom de protéine Gx, est un récepteur couplé aux protéines G (RCPG) qui agit comme le transducteur central de la voie de signalisation hedgehog, essentielle au développement embryonnaire et impliquée dans le cancer. Références associées : PMID:19592253, PMID:27437577, PMID:28344083
• SMO est activée par la liaison du cholestérol suite à la stimulation par le ligand hedgehog, conduisant à l'inhibition de l'adénylate cyclase médiée par la protéine G G(i) et à une réduction des taux d'AMPc, ce qui libère à son tour les facteurs de transcription GLI pour réguler l'expression des gènes cibles. Références associées : PMID:28344083, PMID:31168089
• En plus de la modulation canonique de l'AMPc, la SMO active séquestre et inhibe directement la sous-unité catalytique de la protéine kinase A (PKA), PRKACA, au niveau de la membrane cellulaire, empêchant la phosphorylation et le traitement des facteurs de transcription GLI. Références associées : PMID:36202993, PMID:39138140
• SMO facilite également l'élimination du GPR161, un régulateur négatif clé, du cil primaire, assurant ainsi une activation robuste de la voie (par similarité). SMO se localise à la membrane cellulaire et est enrichie dans la membrane du cil primaire, une niche sous-cellulaire cruciale pour la transduction du signal.
• La protéine est modifiée de manière post-traductionnelle par phosphorylation (y compris sur la Ser616), glycosylation, lipidation (liaison du cholestérol) et formation de ponts disulfure, comme indiqué par les mots-clés d'UniProt, et est classée comme un récepteur transmembranaire impliqué dans la signalisation développementale.
• Le dysfonctionnement de SMO est associé à des troubles du développement et au cancer ; son activité est étroitement régulée par l'inhibiteur en amont patched (PTCH1/2) et par l'accès au cholestérol.

Guide expérimental et conseils techniques

• L'immunogène est un peptide synthétique phosphorylé autour de la Ser616 de la SMO humaine, garantissant la spécificité pour la forme phosphorylée ; la réactivité croisée non-phospho doit être évaluée dans les contrôles négatifs.
• Pour le Western blot (WB), une bande d'environ 86 kDa est attendue ; optimisez le blocage et la dilution de l'anticorps pour réduire le bruit de fond dû à l'expression endogène de SMO.
• En ELISA et dot blot (DB), utilisez le peptide phosphorylé comme contrôle positif et le peptide non phosphorylé pour confirmer la spécificité de phosphorylation ; envisagez des tests de compétition par peptide pour la validation.
• Étant donné que SMO se localise aux cils, l'immunodétection dans les lysats de cellules entières peut être difficile ; envisagez des stratégies d'enrichissement ou l'immunofluorescence pour les études de localisation ciliaire.
• L'anticorps présente une réactivité croisée avec la SMO humaine ; pour d'autres espèces, vérifiez l'homologie de séquence au niveau du site de phosphorylation avant utilisation.

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